הערכת טרנסציטוזיס של E. coli על פני חד-שכבות אפיתל במעי

התחל עם תרבית E. coli שבודדה מיילודים עם זיהומים בזרם הדם.

צנטריפוגה כדי לגלול את החיידקים, להשליך את הסופרנטנט ולהשעות מחדש את הגלולה במדיום נטול אנטיביוטיקה.

קח צלחת עם תוספת טרנסוול המכילה חד-שכבת תאי אפיתל במעי.

מדוד את ההתנגדות החשמלית על פני שכבת התא בעזרת בדיקה כדי לאשר את שלמות השכבה החד-שכבתית.

הוסף את התרחיף החיידקי לתוך התוספת ודגירה.

חיידקים נצמדים לתאי אפיתל, מופנמים בתוך שלפוחיות, ומועברים על פני התאים לבאר התחתונה בתהליך הנקרא טרנסציטוזיס.

מדוד שוב התנגדות חשמלית; ערך יציב מאשר חד-שכבה שלמה במהלך טרנסציטוזיס.

מעבירים את התוספת לבאר טרייה ואוספים את המדיום מהבאר התחתונה הקודמת.

צלחת את המדיום שנאסף על צלחת אגר ודגירה כדי לפתח את מושבות החיידקים.

ספרו את המושבות כדי לקבוע את היקף הטרנסציטוזיס של E. coli על פני מחסום האפיתל של המעי.

כל 30 דקות לאחר החיסון, מלאו בארות חדשות ב-500 מיקרוליטר של TCM ללא אנטיביוטיקה, והעבירו את התוספות לבארות החדשות הללו. אסוף את המדיה מבאר האיסוף המשומשת עבור כל תוספת לתוך צינור נפרד עם תווית והנח את הצינור על קרח. החזר את צלחת הטרנסוול לחממה בין נקודות זמן.

עבור כל תוספת, שלב את המדיה שנאספה מנקודות זמן שונות ומערבולת קצרה. צלח את המדיה שנאספה על לוחות מקדחה LB בשיטת דילול המסלול כדי לכמת את מספר החיידקים הטרנסציטוז בשעתיים הראשונות של הניסוי. אספו את המדיה בארבע ושש שעות.

בנוסף, לאחר שש שעות, צלחת המדיה מבארות הבקרה. לאחר שש שעות, מדוד ורשום את ה-TEER. לאחר דגירה של לילה, ספרו את מושבות החיידקים באופן ידני על צלחות LB לדילול המסלול.