דפוס מיקרופלואידית ומעקב מבוסס פלואורסצנטי של צמיחת חיידקים חד-תאיים

התחל עם תרבית חיידקים מתויגת פלואורסצנטית שנוספה למאגר נטול פחמן.

צנטריפוגה כדי לגלול את החיידקים ולהשליך את הסופרנטנט.

השעו מחדש את הגלולה במאגר טרי נטול פחמן המכיל חומר ניקוי עדין.

היעדר מקור פחמן עוצר את הצמיחה, בעוד שחומר הניקוי מונע היווצרות גושים ושומר על תאים תלויים.

טען את התרחיף החיידקי למזרק וחבר אותו למשאבה.

הזרקו את המתלה לכניסה של שבב מיקרופלואידי, המכיל תעלה עם מלכודות משובצות ברצפה.

משוך לאט את הנוזל משקע התעלה.

כאשר הנוזל נסוג, כוחות נימיים מנחים את החיידקים לעבר היציאה.

בתהליך זה, תאי חיידקים בודדים מתיישבים במלכודות, וכתוצאה מכך דפוס חיידקים.

שוטפים את התעלה במרק שחומם מראש ועשיר בחומרים מזינים ברציפות.

החיידקים ממשיכים לגדול ויוצרים מיקרו-מושבות בתוך המלכודות.

השתמש במיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי ללכוד תמונות דולג זמן ולנתח צמיחת חיידקים בסביבה מבוקרת.

הכניסו מיליליטר אחד של מדיום MOPS לבקבוקון צנטריפוגה והוסיפו 10 מיקרוליטר של 0.132 אשלגן פוספט מולרי.

Aliquot 100 מיקרוליטר של תרבית הלילה לבקבוקון הצנטריפוגה וצנטריפוגה את התרבית ב -2,300 פעמים גרם למשך שתי דקות. השליכו בעדינות את הסופרנטנט כדי להשעות את הגלולה במיליליטר אחד של מדיום MOPS טרי עם 0.015% מ-Tween 20 ו-0.01% של אשלגן פוספט והעמיסו את תרחיף החיידקים במזרק של מיליליטר אחד. כדי לאבטח את המזרק ואת חיבור הצינור, הכנס ישירות מחט לתוך הצינור.

כעת הרכיבו את המזרק על משאבת המזרק והזריקו את המתלה לשבב המיקרופלואידי דרך הכניסה הממוקמת בחלק במעלה הזרם של התעלה עד שהמתלה מכסה את אזור התבנית במלכודות. הגדר את משאבת המזרק בקצב זרימה של 0.07 עד 0.2 מיקרוליטר לדקה כדי למשוך את תרחיף החיידקים ולפקח על תהליך הדפוס באמצעות תוכנת מיקרוסקופ. לאחר שהתבנית עוצבה עם תאים, הגדל את קצב זרימת הנסיגה כדי לרוקן במהירות את התעלה המיקרופלואידית ולשטוף אותה ב-LB טרי שהוסר בעבר למשך 30 דקות לפחות והתחמם מראש ב-30 מעלות צלזיוס.

כעת הגדר את משאבת המזרק בקצב זרימה של שני מיקרוליטר לדקה כדי לשטוף בעדינות את התעלה. לאחר מילוי הערוץ, הגדל שוב את קצב הזרימה. רכוש תמונות של חיידקים גדלים בהגדלה ובמרווח הזמן הרצויים.