הערכת ההשפעה של חיידקים מועילים על טרנסלוקציה של חיידקי מעיים בחולדות עם סטרס חום

התחל עם חולדת ניסוי שטופלה מראש בחיידקים מועילים וחולדת ביקורת שקיבלה תמיסת מלח עם פוספט או PBS.

חשוף את שתי החולדות לטמפרטורות גבוהות כדי לגרום ללחץ פיזיולוגי.

בחולדת הביקורת, מתח חום משבש את מחסום האפיתל של המעי, ומאפשר לחיידקים שמקורם במעיים לעבור ולהתפשט לאיברים פנימיים.

עם זאת, בחולדות ניסוי, חיידקים מועילים משחררים מולקולות איתות המשמרות את צמתי האפיתל ומפחיתות טרנסלוקציה של חיידקים.

קח צינורות המכילים את דגימות הכבד שנקטפו מכל חולדה.

הוסף PBS והומוגניזציה של הדגימות כדי לשחרר חיידקים לתוך המאגר.

מורחים את ההומוגנאט המדולל על צלחות אגר עשירות בחומרים מזינים.

דגרו על הצלחות כדי לאפשר למושבות חיידקים להיווצר. לאחר מכן, ספרו את המושבות.

ספירת מושבות גבוהה יותר בדגימת הבקרה מצביעה על שיבוש מחסום המעי וטרנסלוקציה של חיידקים.

לעומת זאת, פחות מושבות בדגימת הניסוי מצביעות על ההשפעה של חיידקים מועילים בהגבלת העברת חיידקים למעיים.

לאחר טיפול בחולדות על ידי גבאז' דרך הפה עם B.subtilis BSB3 או PBS במשך יומיים, ולאחר מכן חלוקת החיות ומדידת הטמפרטורה שלהן, שמור את החולדות מקבוצות 1 ו-2 בטמפרטורת החדר למשך 25 דקות. הניחו בעלי חיים מקבוצות 3 ו-4 בתא אקלים בטמפרטורה של 45 מעלות צלזיוס ו-55% לחות יחסית למשך 25 דקות.

לאחר מכן, לאחר המתת חסד של בעלי החיים, איסוף דם הגזע ובידוד איברים על פי פרוטוקול הטקסט, הוסף PBS סטרילי לכל צינור כדי לקבל משקל אחד עד עשרה לנפח דילול של הדגימה, והשתמש בהומוגנייזר רקמת זכוכית סטרילי כדי ליצור תרחיפי רקמות הומוגניים.

לאחר מכן, השתמש ב-PBS סטרילי כדי לבצע דילולים סדרתיים של כל דגימה. לאחר מכן, צלחת 0.1 מיליליטר מכל הדילולים על פני השטח של אגר הדם של מקונקי ו-5%, ואגר הדם של ברוצלה עם המין וויטמין K1. לאחר הדגירה של הצלחות, השתמש במונה מושבות כדי לספור את המושבות על כל קבוצת צלחות.