אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
Microbiology
0 צפיות • 3:17 דק׳ • March 31st, 2026
התחילו עם Streptococcus pneumoniae שגדלה בביופילם, מתיישב נאזופרינגיאלי אסימפטומטי, התלוי בבופר
מתן את ההשן דרך האף לעכבר לא מורדם, ומאפשר שאיפה לדרכי הנשימה העליונות.
באפיתל הנאזופרינגיאלי, החיידקים יוצרים ביופילם שמסייע להתיישבות ומדכא ייצור ציטוקינים אנטי-ויראליים מתאי המארח.
לאחר ההרדמה, הארכי את לשון העכבר כדי להגיע לקנה הנשימה.
להזריק את וירוס השפעת A לקנה הנשימה כדי להדביק את דרכי הנשימה התחתונות.
לאחר שהעכבר מתאושש, יש לחסן מיד את הווירוס דרך האף כדי לפגוע בדרכי הנשימה העליונות.
זיהום ויראלי מבלבל את מערכת החיסון של המארח ופוגע ברקמת הריר, מה שגורם לפיזור חיידקים למערכת הנשימה התחתונה.
בסביבה הריאתית המושפעת מהווירוס, החיידקים עוברים לפתוגנים פולשים, גורמים לדלקת ריאתית ולהתפשטות מערכתית.
הזיהום גם מדכא את תפקוד הנויטרופילים, ומפחית את פינוי החיידקים.
מודל ההדבקה המשותפת הזה מאפשר חקירת אינטראקציות בין מארח למיקרוביה.
הפשיר את האליקוטים שגדלו בביופילם על קרח וסובב במשקל של 1,700 גרם למשך חמש דקות. הסר והשליך בזהירות את הסופרנטנט מבלי להפריע לכדור. לאחר מכן, שטוף את הכדור על ידי השעתה מחדש ב-1 מיליליטר של PBS וסובב אותו שוב. הסר את הסופרנטנט והחזיר את הכדור בנפח הנדרש כדי להגיע לריכוז הרצוי.
החסן את עכבר השחור C57 בן שישה זכרים דרך האף עם 5 פעמים 10 ליחידות היווצרות מושבה שישית או CFU על ידי פיפסת 5 מיקרוליטרים של החיסון המדולל לכל נריס. לאחר החיסון, החזק את העכבר בחוזקה, מייצב את הראש עד שנשאפת את הנפח. לאחר שהווירוס הפשר, יש לדלל את הווירוס ב-PBS לריכוז הרצוי.
יש להניח חומר סיכה עיניים על עיני העכבר לפני ההרדמה. הדביק מיד את העכבר המורדם ב-50 מיקרוליטר של 20 יחידות יצירת פלאק, או PFU, של וירוס שפעת A או IAV תוך-קנה, באמצעות פינצטה קהה למשיכת הלשון מהפה והעברת נפח הנוזל דרך קנה הנשימה. לאחר ההחלמה, יש לחסן תוך-אף 10 מיקרוליטר של 200 PFU של IAV באמצעות שיטת החיסון שתוארה קודם.