זיהוי סכריבקטריה בתרבות בינארית באמצעות תגובת שרשרת פולימראז

התחל עם תרבית אקטינומיצס נגועה בסכריבקטריה.

סכריבקטריה, חיידק טפילי קטן במיוחד, והמארח שלו יוצרים תרבית בינארית.

הוסיפו אליקו של התרבית הנגועה לצינור PCR המכיל תגובות הגברה עם צבע מעקב אלקטרופורזה ופריימרים ייחודיים לסוכריקטריה.

שים את הצינור בתרמחזור עם תנאי PCR מוגדרים.

במהלך הדנאטורציה הראשונית, החום מפרק את הסכריבקטריה, ומשחרר DNA גנומי. אקטינומיצס נשארים שלמים בשל דפנות תאים נוקשות, מה שמגביל את שחרור ה-DNA של המארח.

החום מפרק את גדילי ה-DNA של הסכריבקטריה ומפעיל פולימראז טק.

במהלך החישול, הפריימרים נקשרים לרצפים משלימים בגנום הסכריבקטריה.

בהרחבה, פולימראז Taq מוסיף dNTPs לפריימרים, ומסנתז גדילי DNA חדשים.

טען את מוצר ה-PCR המוגבר על ג'ל אגרוז שמוצבע מראש בצבע שנקשר לשברי ה-DNA.

הרץ אלקטרופורזה וראה את הג'ל תחת אור UV.

רצועת אמפליקונים ספציפית לסכריבקטריה מאשרת אינטראקציה בין מארח לטפיל בתרבות הבינארית.

Aliquot 24 מיקרוליטרים של PCR master mix לצינור PCR בנפח 0.2 מיליליטר. במיקרוליטר אחד של תרבית נגועה בסוכריה, והנח את הצינור במחזור תרמו.

הגדר את תוכנית ה-PCR כפי שמתואר בכתב היד. טען והפעיל את מוצרי ה-PCR על ג'ל אגרוס 1%. רצועה של כ-600 בסיסים תאשר את נוכחות הסכריבקטריה.