אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
Neuroscience
0 צפיות • 2:18 דק׳ • July 8th, 2025
קח תרבית של תאי אב עצביים מושרים, או iNPCs, על צלחת מרובת בארות מצופה חלבון מטריצה חוץ-תאית.
החלף את המדיה במדיית אינדוקציה גליאלית ודגירה. גורמי גדילה והורמונים בתקשורת מקלים על התמיינות iNPC לתאי מבשר גליה.
החלף את המדיה כל יומיים לשגשוג תאים. לאחר מכן, החליפו את המדיה במצע אסטרוציטים ודגרו.
חומרים מזינים ספציפיים וגורמי גדילה במדיה מניעים התמיינות תאי מבשר גליה לאסטרוציטים.
שינויים במדיה כל יומיים מקדמים את התבגרות האסטרוציטים.
שנה את המדיום למדיום נוירו-דיפרנציאלי כאשר התאים מתכנסים בכ-70% והמשיכו לשנות את המדיום כל יומיים במשך שלושה שבועות. אין לפצל את התאים במהלך ההתמיינות. לאחר שלושה שבועות, התאים צריכים לבטא את הסמן העצבי TuJ1.
כדי להשיג נוירונים ותת-סוגים עצביים בוגרים יותר, המשיכו להתמיין עד שלושה חודשים. לצורך התמיינות של iNPCs במיוחד כלפי שושלת גליה, שנה את המדיום למדיום אינדוקציה גליאלי, כולל 20 ננוגרם למיליליטר של גורם גדילה אפידרמיס כדי לגרום להתמיינות לתאי מבשר גליה. הסר מחצית מהמדיום והחלף במדיום טרי כל יומיים למשך כשבועיים.
במהלך תקופה זו, יש לפצל תאים 1 עד 3 בנוכחות 10 מעכבי רו-קינאז מיקרו-מולאריים כאשר מגיעים למפגש של 100%. לאחר שבועיים, בדלו את התאים עוד יותר לאסטרוציטים על ידי שינוי המדיום למדיום אסטרוציטים זמין מסחרית כאשר התאים כמעט מתכנסים ועל ידי המשך החלפת המדיום כל יומיים. כשבעה ימים לאחר מכן, תאים מתחילים לבטא סמני אסטרוציטים.