אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
Neuroscience
0 צפיות • 3:13 דק׳ • July 8th, 2025
קח תרחיף אסטרוציטים.
הוסף תמיסת דיו ביולוגית המכילה ג'לטין, נגזרות ג'לטין הניתנות לקישור פוטו, פוטו-יוזמים, פיברינוגן ולמינין.
העבירו את המתלה למזרק עם מחט קהה.
מצננים את המזרק לג'ל דיו ביולוגי. חבר את המזרק לראש ההדפסה של המדפסת הביולוגית.
מקם את המחט כראוי לצלחת התרבות. התחל הדפסה ביולוגית עם פרמטרים מוגדרים ועיצוב.
דיו ביולוגי המכיל אסטרוציטים נדחף החוצה מהמחט, ומופקד בשכבות על הצלחת, ויוצר מבנה תלת מימדי עם אסטרוציטים לכודים.
חשוף את המבנה המודפס ביולוגית לאור אולטרה סגול. הפוטו-יוזם מסייע בקישור צולב של נגזרת ג'לטין, ומשפר את יציבות ה-bioconstruct.
טפל ביוני טרומבין וסידן.
תרומבין, עם יוני סידן, ממיר פיברינוגן לפיברין, ומתאסף לרשת ביופולימר תלת מימדית יציבה.
השליכו את התמיסה ושטפו עם מאגר כדי להסיר את חומרי הקישור הצולבים.
הוסיפו את האסטרוציטים ודגרו. למינין מסייע להידבקות והתפשטות אסטרוציטים, ויוצר רקמה תלת-ממדית דמוית עצב עשירה באסטרוציטים.
כדי להשיג ריכוז סופי של 1 x 106 תאים למיליליטר, העבירו 1 מיליליטר של תמיסת ג'לטין-ג'לטין-מתאקרילויל-פיברינוגן לצינור המכיל את התאים, והומוגניזציה על ידי פיפטינג עדין למעלה ולמטה. השתמש בפיפטה של 1000 מיקרוליטר כדי להעביר לאט את האסטרוציטים המונחים בתמיסת דיו ביולוגית ג'לטין-ג'לטין-מתקרילויל-פיברינוגן למזרק פלסטיק של 5 מיליליטר, ולהימנע מהיווצרות בועות. חבר מחט קהה סטרילית בגודל 22 למזרק.
חשוף את המדפסת הביולוגית לאור UV למשך 15 דקות, ולאחר מכן נגב את המדפסת הביולוגית עם 70% אתנול. לאחר מכן חבר את המזרק לראש ההדפסה של המדפסת הביולוגית, ושטוף ידנית את הדיו הביולוגי כדי להסיר את הבועות הנותרות.
כדי לבצע הדפסה ביולוגית, הניחו צלחת תרבית בגודל 35 מילימטר על שולחן המדפסת הביולוגית. מקם את המחט במרחק של 0.1 מילימטרים ממשטח צלחת התרבות כדי לאפשר תנועה של המחט, ולחץ על כפתור ההדפסה. לאחר סיום ההדפסה הביולוגית, ודא שהמזרק מתרחק מהצלחת וסגור את צלחת התרבית. הנח את צלחת התרבות תחת אור UV לקישור צולב של ג'לטין-מתאקרילויל.
השתמש במרית סטרילית כדי להעביר את המבנה המודפס ביולוגית לצלחת של 24 בארות, הוסף 500 מיקרוליטר של תמיסת סידן כלורי תרומבין והשאיר למשך 30 דקות כדי לאפשר קישור צולב של פיברין. לאחר הסרת תמיסת הקישור הצולבת, יש לשטוף את המבנה עם 2 מיליליטר PBS. לאחר מכן, החלף את ה-PBS ב-1 מיליליטר של מדיום תרבית אסטרוציטים. דגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני, והחלפת המדיום כל שלושה ימים.