אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
Neuroscience
0 צפיות • 2:26 דק׳ • July 8th, 2025
קחו למשל נוירונים המושרים על ידי בני אדם, או iNs, שגודלו על מטריצה חוץ-תאית.
הסר את המדיה והוסף אנזימי עיכול המשבשים את המטריצה, ומפרקים את התאים.
העבירו את ה-iNs לתוך צינור. צנטריפוגה את התרחיף והשליכו את הסופרנטנט המכיל את האנזימים.
השעו מחדש את ה-iNs במדיום של תרבית משותפת; העבירו אותם לתרבית של תאי קודמן אוליגודנדרוציטים מושרים, או iOPCs.
iOPCs הם קודמים לאוליגודנדרוציטים היוצרים מעטפות מיאלין סביב האקסונים של נוירונים.
עם הדגירה, ה-iOPCs יוצרים קשרים סינפטיים עם ה-iNs. גורמים טרופיים המשתחררים על ידי ה-iOPCs וגורמי הגדילה בתווך מקדמים את הבשלת ה-iN לנוירונים, ומציגים תהליכים תאיים מוגברים היוצרים קשרים סינפטיים עם נוירונים אחרים.
הפעילות החשמלית של הנוירונים הבוגרים וגורמי הגדילה בתווך גורמת להבשלת iOPC לאוליגודנדרוציטים.
האוליגודנדרוציטים מרחיבים תהליכים תאיים, ויוצרים מעטפות מיאלין סביב האקסונים העצביים.
התרבות המשותפת המבוססת מוכנה לניתוח.
ביום ה-14, צלחת iOPCs בצפיפות של 1 x 105 תאים לבאר בצלחת של 24 בארות במדיום התמיינות OPC. למחרת, נתק את הנוירונים האנושיים המושרים עם תמיסת ניתוק תאים. הוסף נוירונים ל-OPCs המתורבתים, ציפוי בצפיפות ישיבה של 2 x 105 תאים לבאר. השתמש במדיום תרבית משותפת המכיל מדיום A-עצבי בסיסי, תוסף B-27 2% ו-100 ננוגרם למיליליטר T3 טריודותירונין. החלף את המדיום למחרת, ולאחר מכן כל יומיים. אם OPCs מתרבים מהר מדי ומגיעים למפגש תוך פחות משלושה ימים, הוסף 2 עד 5 מיקרו-מולרי Ara-C.