אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
Neuroscience
0 צפיות • 2:18 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם צלחת מרובת בארות המכילה תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים דבוקים עם יכולת התמיינות מרובת שושלות.
הכנס מדיום תאי גזע המכיל דימתיל סולפוקסיד או DMSO.
DMSO נכנס לתאים ומונע את התקדמות מחזור התא משלב הפער 1, או G1, שלב ראשוני של מחזור התא, לשלב הסינתזה, או שלב S.
זה יוצר אוכלוסייה אחידה של תאים בשלב G1, ומשפר את יכולת ההתמיינות שלהם.
החלף את המדיום במדיום התמיינות אקטודרמלי עשיר בחומרים מזינים המכיל מעכבים של מסלולי האיתות BMP ו-TGF-β.
מעכבים אלה נקשרים לקולטני ALK ספציפיים בתאי הגזע, חוסמים את מסלולי האיתות BMP ו-TGF-β ומונעים את התמיינותם לאנדודרם ומזודרם.
זה מאפשר התמיינות סלקטיבית של תאי גזע שנעצרו על ידי G1 לקודמנים אקטודרמליים בעלי יכולת התמיינות עצבית.
החלף באופן קבוע את המדיום במדיום טרי כדי לשמור על רמות החומרים המזינים וגורמי ההתמיינות, מה שמבטיח את הישרדות התאים.
טפל בתאים עם DMSO כמתואר עבור תרביות דו-ממדיות והכין פתרונות Noggin ו-SP431542 Stock. הכן מספיק החלפת סרום נוקאאוט של 10% או KOSR בנוקאאוט DMEM לשלושה עד ארבעה ימים של החלפת מדיה. הכן מדיית התמיינות אקטודרמלית על ידי הוספת Noggin ו-SP431542 ל-DEM נוקאאוט KOSR שחומם מראש כמתואר בכתב היד.
לאחר טיפול מקדים ב-DMSO, יש לשאוב מדיה מהתאים ולהוסיף 2 מיליליטר של מדיית התמיינות לכל באר. אפשר לתאים לדגור במשך שלושה עד ארבעה ימים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באינקובטור פחמן דו חמצני, ולהחליף את המדיה מדי יום בגורמי התמיינות טריים.