הקלטה אופטית של פעילות עצבית בפרוסות מוח מוכתמות בצבע רגיש למתח

קחו פרוסת מוח של עכבר משותק המוכתמת בצבע רגיש למתח או VSD, מולקולות פלואורסצנטיות המשתלבות בקרום העצבי ומגיבות לשינויים פוטנציאליים בממברנה.

הנח את הפרוסה בתא הקלטה.

התקן את אלקטרודת ההארקה עבור כרך בסיסtagהתייחסות.

לאחר מכן, מקם את האלקטרודות המגרות וההקלטה על הפרוסה.

הפעל דופק חשמלי.

הדופק מגרה את הנוירונים, מפעיל פתיחת תעלת נתרן מגודרת מתח וזרם יוני נתרן, מה שמוביל לשינוי פוטנציאל הממברנה.

זה גורם לפוטנציאל פעולה, הנמדד על ידי אלקטרודת ההקלטה, ומשנה את התכונות הפלואורסצנטיות של ה-VSD.

חשוף את פרוסת המוח לאורך גל ספציפי כדי לעורר את ה-VSD ולעורר פליטת פלואורסצנטיות.

לאחר הגירוי, תעלות הנתרן נסגרות בעוד תעלות האשלגן המגודרות במתח נפתחות, מה שמקדם את פליטת יוני האשלגן.

זה משנה שוב את פוטנציאל הממברנה וכתוצאה מכך משנה את הקרינה של ה-VSD.

רשום את הקרינה בזמן אמת כדי לייצג חזותית את הפעילות העצבית.

כדי להתחיל בהליך זה, הפעל את המגבר, המחשב ומערכת המצלמה ופתח את התוכנה. יוצקים aCSF בצינור של 50 מיליליטר, ומבעבעים אותו בקרבוגן. השתמש במשאבה פריסטלטית כדי להפיץ את ה-aCSF, והתאם את קצב הזרימה לכמיליליטר אחד לדקה.

לאחר מכן, התאם את גובה פיפטת היניקה כך שמפלס הנוזל בתוך תא הניסוי יהיה תמיד קבוע. הנח את האלקטרודה הקרקעית בתא. לאחר מכן, מלאו את אלקטרודת הזכוכית בכמות קטנה של aCSF, והניחו אותה במחזיק האלקטרודה. חבר את המחזיק למוט המניפולטור.

בעזרת מגבר, ודא שהתנגדות האלקטרודה היא כ -1 מגה-אוהם. בסשן ההקלטה, העבירו פרוסה מהתא הלח לתא ניסוי. לחץ את קצה הטבעת בחוזקה לתוך טבעת ה-O מסיליקון. היזהר לא לשבור את הממברנה או את תחתית תא הניסוי.

מתחת למיקרוסקופ, הנח את קצה האלקטרודה המגרה ואת אלקטרודת הקלטת פוטנציאל השדה על הפרוסה. בדוק את התגובה המעוררת על ידי מתן גירוי. ודא ששדה הראייה מכסה את המעגל העצבי הנכון במערכת ההקלטה האופטית.

לאחר מכן, התאם את עוצמת אור העירור לכ-70% עד 80% מהקיבולת המרבית של המצלמה. באמצעות מקור האור הפלורסנט, כוונן את המיקוד עם מערכת הרכישה. לאחר מכן, התחל את ההקלטה, ונתח את הנתונים בתוכנת רכישת תמונות לאחר הרכישה.