ניתוח אולטרה-מבני של קטע מוח של עכבר באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים שידור

קח קטע מוח של עכבר קבוע באוסמיום טטרוקסיד המוטבע בגוש שרף.

השג תמונת חתך ויישר אותה עם תמונת אטלס שהוכנה מראש כדי לזהות את אזור העניין.

סמן את גבולות האזור הזה על הגוש.

מחממים את השרף כדי לרכך אותו ולהוציא את האזור המסומן.

הדביקו את הדגימה למוט אחיזה מזכוכית וחתכו אותה.

בעזרת אולטרה-מיקרוטום, הכינו חלקים דקים למחצה ואולטרה-דקים.

העבירו את החלקים הדקים למחצה והאולטרה-דקים על מנשאי זכוכית ורשתות ניקל, בהתאמה.

מכתים את החלקים הדקים למחצה בצבע שנקשר לחומצות גרעין, ציטופלזמה עשירה בריבוזום והמטריצה החוץ-תאית.

שטפו את החלקים ובחנו אותם במיקרוסקופ אור כדי לאשר את נוכחות אזור היעד.

התבונן בחלקים האולטרה-דקים תחת מיקרוסקופ אלקטרונים שידור.

אוסמיום טטרוקסיד משפר את צפיפות האלקטרונים של ממברנות התאים והאברונים, ומספק ניגודיות גבוהה כנגד הציטופלזמה הפחות צפופה באלקטרונים, ומאפשר הדמיה של אולטרה-מבנה תאי.

למיפוי אזור עניין, בחרו תמונה הכוללת את אזור העניין מאטלס התמונות שהוכן קודם לכן. שרטט את גבולות אזור העניין על התמונה המחולקת. הנח אופטית את הגבולות הללו על הדגימה המוטמעת מתחת למיקרוסקופ, והשתמש במחט בגודל 26 אינץ' כדי לגרד את גבולות האזור הללו על דגימת השרף. לאחר מכן, מחממים את הדגימות ל-95 מעלות צלזיוס על מנת לרכך את השרף.

לאחר מכן, הוציאו את דגימות השרף החמות מהתנור, והשתמשו בסכין גילוח כדי לכרות את אזורי העניין. הדביקו את הדגימות על מוטות אחיזה מזכוכית אקרילית בקליבר המתאים, וחתכו את הדגימות המותקנות לחיתוך חצי דק ואולטרה. השתמש באולטרה-מיקרוטום כדי לרכוש קטעים דקים למחצה של 0.7 מיקרומטר ו-70 ננומטר דקים במיוחד, תוך איסוף החלקים הדקים למחצה על מנשאי זכוכית והחלקים הדקים במיוחד על רשתות ניקל.

צבעו את החלקים הדקים למחצה בכחול טולואידין 1% ב-PBS למשך ארבע דקות, ולאחר מכן מספר שטיפות במים נטולי יונים לפני בחינת החלקים במיקרוסקופ אור. לאחר מכן ניתן להעריך ישירות את החלקים הדקים במיוחד על ידי מיקרוסקופ אלקטרונים הולכה ב-180 קילו-וולט, ללא שינוי נוסף.