Name: אופטימיזציה מהירה של מערכת השראת אור לשליטה בביטוי גנים של יונקים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-04T14:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: למד אופטימיזציה של ביטוי גנים מושראי אור בתאי HEK293T באמצעות כלי אופטוגנטי LACE. שיטה זו מאפשרת שליטה מדויקת בביטוי גנים ביונקים לחקר תפקוד גני ותרפיה גנית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>צינורות מיקרוצנטריפוגה 1.5 מ"ל</td><td>VWR</td><td>10025-724</td><td></td></tr><tr><td>מאגרי ריאגנט של 10 מ"ל</td><td>VWR</td><td>77395-252</td><td></td></tr><tr><td>פיפטות סרולוגיות 10 מ"ל</td><td>VWR</td><td>75816-100</td><td></td></tr><tr><td>1000 & mu; קצות פילטר L</td><td>VWR</td><td>76322-154</td><td></td></tr><tr><td>15 מ"ל&nbsp; צינורות צנטריפוגה בעלי ביצועים גבוהים, פקק שטוח</td><td>VWR</td><td>89039-664</td><td></td></tr><tr><td>מד הספק אופטי 1931-C</td><td>ניופורט</td><td>1931-C</td><td></td></tr><tr><td>פיפטות סרולוגיות של 2 מ"ל</td><td>VWR</td><td>75816-104</td><td></td></tr><tr><td>20 & mu; קצות פילטר L</td><td>VWR</td><td>76322-134</td><td></td></tr><tr><td>200 & mu; קצות פילטר L</td><td>VWR</td><td>76322-150</td><td></td></tr><tr><td>צינורות צנטריפוגה בעלי ביצועים גבוהים בנפח 50 מ"ל, מכסה שטוח</td><td>VWR</td><td>89039-656</td><td></td></tr><tr><td>לוחות V-bottom עם 96 בארות</td><td>לוחות מותג</td><td>781661</td><td></td></tr><tr><td>A21, נורת LED אדומה</td><td>נורות בלוקס</td><td>לא זמין</td><td>מקור אור אדום</td></tr><tr><td>תוכנת Arduino IDE</td><td>ארדואינו</td><td>לא זמין</td><td></td></tr><tr><td>ארון בטיחות ביולוגית, מחלקה II</td><td>NuAire</td><td>לא זמין</td><td></td></tr><tr><td>המוציטומטר קווי בהיר</td><td>האוסר סיינטיפיק</td><td>3110</td><td></td></tr><tr><td>שקופיות ספירת תאים</td><td>BioRad</td><td>1450016</td><td></td></tr><tr><td>לוח תרבית תאים 96-באר, לוח תחתית זכוכית #1.5H</td><td>סלביס</td><td>P96-1.5H-N</td><td></td></tr><tr><td>תוכנת CytExpert</td><td>בקמן קולטר</td><td>לא זמין</td><td></td></tr><tr><td>CytoFLEX מוכנים לשימוש יומיומי ב-QC פלואורוספירות</td><td>בקמן קולטר</td><td>C65719</td><td>4 & דרגה C</td></tr><tr><td>ציטומטר זרימה CytoFLEX-S (4 סגול, 2 כחול, 4 צהוב ירוק, 3 תעלות אדומות)</td><td>בקמן קולטר</td><td>C09766</td><td></td></tr><tr><td>אבקת מלח עם בופר פוספט של Dulbecco, ללא קליקום, ללא מגנזיום</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>21600069</td><td>טמפרטורת החדר</td></tr><tr><td>צנטריפוגה אפנדורף 5804</td><td>אפנדורף</td><td>&nbsp; 022622501</td><td>שלב צנטריפוגה עם פלטת V תחתית</td></tr><tr><td>צנטריפוגה אפנדורף 5810R</td><td>אפנדורף</td><td>22625501</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research פלוס, 8 ערוצים, נפח משתנה, 30 - 300 & mu; L</td><td>אפנדורף</td><td>3125000052</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research פלוס, ערוץ יחיד, נפח משתנה, 100 - 1000 & mu; L</td><td>אפנדורף</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research פלוס, ערוץ יחיד, נפח משתנה, 2 - 20 & mu; L</td><td>אפנדורף</td><td>3123000039</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research פלוס, ערוץ יחיד, נפח משתנה, 20 - 200 & mu; L</td><td>אפנדורף</td><td>3123000055</td><td></td></tr><tr><td>סרט תיוג מעבדה כללי</td><td>VWR</td><td>89097-920</td><td></td></tr><tr><td>Gibco DMEM, אבקה, סוכר גבוה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12100061</td><td>4 & דרגה C</td></tr><tr><td>תמיסת Gibco Trypan Blue, 0.4%</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>15-250-061</td><td>טמפרטורת החדר</td></tr><tr><td>FBS מושבתת Gibco Value Heat</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>A5256901</td><td>-20 & דרגה C</td></tr><tr><td>Gibco, Trypsin-EDTA (0.05%), עם EDTA, Animal Origin, 1X, פנול אדום, 500 מ"ל</td><td>גיבקו</td><td>25300062</td><td>-20 & דרגה C</td></tr><tr><td>HEK293T תאים</td><td>ATCC</td><td>CRL-11268</td><td>-80 ו-deg; C, חנקן נוזלי</td></tr><tr><td>סמני מעבדה, Micronova</td><td>VWR</td><td>89205-944</td><td></td></tr><tr><td>מנורת שולחן מתכתית</td><td>עיצובים פשוטים</td><td>לא זמין</td><td>מנורה לאור אדום</td></tr><tr><td>OptoPlate-96</td><td>LABmaker</td><td>לא זמין</td><td></td></tr><tr><td>XP פיפט-אייד</td><td>דרומונד</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>פלסמיד: CIBN-gRNA</td><td>לא זמין</td><td>לא זמין</td><td>-20 & דרגה C</td></tr><tr><td>פלסמיד: CMV-eGFP</td><td>לא זמין</td><td>לא זמין</td><td>-20 & דרגה C</td></tr><tr><td>פלסמיד: CRY2-eGFP</td><td>לא זמין</td><td>לא זמין</td><td>-20 & דרגה C</td></tr><tr><td>תגובת DNA פוליג'ט במבחנה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>NC1536117</td><td>4 & דרגה C</td></tr><tr><td>בקבוק תרבית תאים T-75</td><td>VWR</td><td>10062-860</td><td></td></tr><tr><td>חממה CO2 עם מעטפת מים</td><td>VWR</td><td>10810-884</td><td></td></tr></tbody></table>

אופטימיזציה מהירה של מערכת השראת אור לשליטה בביטוי גנים של יונקים

Rapid Optimization of a Light-Inducible System to Control Mammalian Gene Expression

Inducible gene expression tools can open novel applications in human health and biotechnology, but current options are often expensive, difficult to ...

rapid-optimization-light-inducible-system-to-control-mammalian-gene

Research

JoVE Journal

Bioengineering

סרטון זה מדגים את מערכת ביטוי הגנים טטרציקלין, או Tet-On, במודל עכבר. בנוכחות דוקסיציקלין, נגזרת טטרציקלין, מערכת טט-און המורכבת מחלבון טרנסאקטיבטור מבוקר טטרציקלין הפוך מופעלת ומביעה את הגן המעניין.

ביטוי גנים מבוסס מערכת מושרה Tet-On ב- Vivo: מערכת ביטוי גנים המושרה על ידי טטרציקלין להפעלת שעתוק גני מטרה במודל עכבר

פרוטוקול זה מתאר הליך ניסיוני לבנייה המהירה של גורמי שעתוק מלאכותיים (ATFs) עם כתבי ה-GFP מאותו מקור וכימות של יכולת ATFs כדי לעורר ביטוי של GFP באמצעות cytometry זרימה.

סינתזה והקרנה של גורמי שעתוק הופעל כימי עם כתבים המבוסס על ה-GFP מהיר

השיטה המתוארת כאן משמשת לגרימת מפל האיתות האפופטוטי בשלבים מוגדרים על מנת לנתח את הפעילות של חלבון אפקטור חיידקי אנטי-אפופטוטי. שיטה זו יכולה לשמש גם לביטוי השראה של חלבונים פרו-אפופטוטיים או רעילים, או לניתוח הפרעות עם מסלולי איתות אחרים.

יישום מערכת ביטוי עין מתנהלת לחקר הפרעות של גורמים בקטריאלי ארסיות עם איתות תאיים

פרוטוקול זה מתאר אסטרטגיה optogenetic כדי לווסת מיטוגן המופעל חלבון קינאז (MAPK) פעילות במהלך התמיינות תאים והתפתחות עובריים Xenopus . שיטה זו מאפשרת הפעלה הפיכה של המסלול איתות MAPK בתרבית תאים יונקים ועל אורגניזמים חיים תאיים, כמו עוברי Xenopus , עם רזולוציה מרחבית וזמנית גבוהה.

אור בתיווך אפנון הפוך של מיטוגן המופעל חלבון קינאז נתיב במהלך הבחנה Cell ו<em&gt; קסנופוס</em&gt; התפתחות עובריים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לנתח-לתא בהעברת מידע מתנדנדות על ידי שליטה optogenetic ולחיות ניטור של ביטוי גנים. גישה זו מספקת פלטפורמה ייחודית לבחון את משמעות תפקודית של תוכניות ביטוי גנים דינמי במערכות רב תאיים.

שיטת Optogenetic לשלוט ולנתח ג'ין תבניות ביטוי באינטראקציות לתא

פרוטוקול זה מתאר את השלבים הדרושים כדי ליצור מערכת מודל שבו שעתוק של גנים אנדוגני עניין יכול להיות מותנה נשלט בעלי חיים או תאים באמצעות מדכא. שבולם משופרת lac ו/או מערכות activator ט .

In vivo היישום של מערכת שליטה מרחוק עבור הביטוי מניפולציה של ג'ין אנדוגני

שליטה אמינה בתאי יונקים מגיבים לאור דורשת סטנדרטיזציה של שיטות אופטוגנטיות. לקראת מטרה זו, מחקר זה מתאר צינור של בניית מעגלי גנים, הנדסת תאים, פעולת ציוד אופטוגנטי, ובדיקות אימות כדי לתקנן את המחקר של ביטוי גנים המושרה באור באמצעות מעגל גנים אופטוגנטי משוב שלילי כמקרה מבחן.

הנדסה אמינה ושליטה במעגלי גנים אופטוגנטיים יציבים בתאי יונקים

אופטוגנטיקה היא כלי רב עוצמה עם יישומים רחבי היקף. פרוטוקול זה מדגים כיצד להשיג ביטוי גנים שאינו ניתן לניתוק לאור בעוברי דגי זברה באמצעות מערכת TAEL/C120 בעלת אור כחול.

ביטוי GFP המושרה באור בעוברי דגי זברה באמצעות מערכת TAEL/C120 האופטוגנטית

אור ביולומינציה הנפלט על ידי אנזים לוציפראז המחמצן מצע של מולקולה קטנה, ניתן לרתום לוציפרין כדי להפעיל חלבונים פוטו-חושיים, ובכך להוסיף ממד נוסף לגירוי האור ולאפשר מניפולציה של שפע של פונקציות בתיווך אור בתאים על פני קשקשים זמניים ומרחביים.

אופטוגנטיקה ביולומינסנטית 2.0: רתימת ביולומינציה להפעלת חלבונים פוטו-חושיים במבחנה וב-Vivo

שליטה אופטוגנטית בחילוף החומרים המיקרוביאלי מציעה שליטה דינמית גמישה על תהליכי תסיסה. הפרוטוקול כאן מראה כיצד להגדיר תסיסה מווסתת אור כחול לייצור כימי וחלבון בקנה מידה נפחי שונה.

תסיסה מבוקרת אור לייצור כימיקלים וחלבון מיקרוביאליים

פרוטוקול זה מתאר את היישום של תחום מתג אלוסטרי מהונדס המופעל על ידי אור כחול (LightR) עבור בקרה מרחבית-טמפורלית הפיכה של פעילות החלבון. תוך שימוש ב-Src טירוזין קינאז כמודל, מחקר זה מציע פרוטוקול מפורט לפיתוח ואפיון Src מווסת אור (LightR-Src). הוא מדגים את הרבגוניות של גישה זו בכל סוגי האנזימים.

בקרה מרחבית-זמנית של פעילות החלבונים באמצעות ויסות אלוסטרי אופטוגנטי

למד אופטימיזציה של ביטוי גנים מושראי אור בתאי HEK293T באמצעות כלי אופטוגנטי LACE. שיטה זו מאפשרת שליטה מדויקת בביטוי גנים ביונקים לחקר תפקוד גני ותרפיה גנית.

אופטימיזציה מהירה של מערכת השראת אור לשליטה בביטוי גנים של יונקים

גלה סרטונים נוספים