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Microbiology
0 visualizzazioni • 2:14 min. • September 26th, 2025
Iniziamo con un ceppo batterico bioluminescente marino che trasporta l'operone di luminescenza, che codifica per la luciferasi e gli enzimi necessari per la sintesi del substrato.
Analizza la varietà su una piastra di agar ricca di sostanze nutritive integrata con acqua di mare artificiale per imitare la salinità nativa e sostenere la crescita.
Incubare per ottenere colonie discrete, quindi isolare e inoculare una singola colonia in un mezzo liquido contenente acqua di mare artificiale.
Incubare con agitazione per favorire la crescita notturna nella fase esponenziale.
Trasferire un volume definito della coltura notturna in un terreno fresco e incubarlo per aumentare la densità batterica.
Man mano che la popolazione si espande, i batteri rilasciano autoinduttori, molecole di segnalazione che si accumulano e si diffondono nelle cellule, dove si legano ai recettori intracellulari, attivando l'operone di luminescenza.
Questa attivazione induce l'espressione della luciferasi e la biosintesi del substrato.
La luciferasi catalizza l'ossidazione del substrato, emettendo luce blu-verde.
Monitorare la coltura per la bioluminescenza come indicatore dell'attivazione dell'operone di luminescenza e dell'emissione di luce nei batteri marini.
Dopo aver preparato i terreni secondo il protocollo di testo, striare i ceppi batterici bioluminescenti su piastre di agar medie artificiali con acqua di mare e incubarli a 24-30 gradi Celsius durante la notte.
Preparare una coltura notturna inoculando 100 millilitri di terreno di acqua di mare artificiale con una singola colonia dalla piastra. Quindi incubare la coltura a 24-30 gradi Celsius e 120 giri/min durante la notte. Il giorno seguente, inoculare 800 millilitri di terreno di acqua di mare artificiale con 8 millilitri di coltura notturna.
Incubare le cellule batteriche a 24-30 gradi Celsius e 120 giri/min e osservare le cellule fino a quando non iniziano a brillare.