JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiology
0 visualizzazioni • 2:08 min. • September 26th, 2025
Prendi un piatto a sciame sfumato con agar a doppio strato. Lo strato inferiore, contenente un inibitore, è stato versato per creare un gradiente dell'inibitore.
La piastra contiene pozzetti isometricamente distanziati per fornire uno spazio appropriato per lo sciame batterico o la migrazione collettiva, prevenendo le sovrapposizioni dello sciame.
Inoculare i pozzetti con una coltura batterica e incubare la piastra.
In basse concentrazioni di inibitori, i batteri coordinano il loro movimento flagellare, avviando la migrazione collettiva o la sciamatura.
In presenza di alte concentrazioni di inibitori, l'inibitore sopprime l'espressione dei geni correlati ai flagelli.
Ciò si traduce in un movimento flagellare limitato, che porta a una motilità di sciamatura limitata.
Fotografare la lastra sotto la luce bianca a intervalli regolari per catturare il modello di sciamatura.
Durante l'imaging, regolare il tempo di esposizione per migliorare la luminosità degli sciami.
Modifica le impostazioni di soglia per ridurre al minimo l'interferenza della luce di sfondo e aumentare il contrasto.
Salvare l'immagine per una successiva analisi dell'effetto della concentrazione di inibitori sullo sciame batterico.
Aggiungere 80 microlitri della coltura di crescita notturna in ogni pozzetto. Estrarre le piastre dello sciame dall'incubatrice una alla volta ogni 12 ore e posizionarle nel sistema di imaging su gel.
Selezionare la modalità di imaging gel, esporre la piastra dello sciame alla luce bianca e regolare la lunghezza focale per ottenere una visione chiara degli sciami. Migliora la luminosità degli sciami per un'osservazione precisa regolando il tempo di esposizione a 300 millisecondi. Regolare la soglia per ridurre al minimo l'interferenza della luce di sfondo.
Salvare il file immagine per ulteriori analisi.