JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiology
0 visualizzazioni • 2:28 min. • October 30th, 2025
Inizia con un coprioggetto in vetro seminato con una cocoltura di batteri mobili marcati in modo fluorescente e batteri non mobili non marcati.
Prendi il piatto contenente un tampone di agarosio infuso di sostanze nutritive e rimuovi con cura lo stampo in silicone circostante.
Inclinare il piatto e utilizzare una spatola piegata per far scorrere sotto il bordo del pad. Quindi posizionarlo sul coperchio di una piastra di Petri.
Trasferire il tampone, con il lato inferiore rivolto verso il basso, nella piastra contenente le cellule batteriche per garantire un contatto uniforme con lo strato batterico.
Premere delicatamente il tampone per eliminare eventuali bolle d'aria.
Posizionare le salviettine pre-bagnate attorno al bordo del piatto per mantenere l'umidità.
Sotto un microscopio invertito, traccia il comportamento batterico in un periodo di tempo.
Man mano che i batteri crescono, i batteri non mobili rilasciano attrattivi chimici. I batteri mobili percepiscono questi segnali e si spostano verso le colonie batteriche non mobili.
Nel tempo, i batteri mobili si accumulano e invadono le colonie batteriche non mobili, confermando le interazioni batteriche.
Una volta che i tamponi sono asciutti, pipettare un microlitro di co-coltura in modo uniforme sul fondo di un coprioggetto sterile preriscaldato da 35 millimetri di vetro.
Rimuovere il ritaglio di silicone dallo stampo di agarosio utilizzando una pinzetta sterile, inclinarlo lateralmente e infilare una spatola leggermente piegata sotto il bordo del tampone di agarosio per farlo cadere su un coperchio sterile della piastra di Petri.
Trasferire il tampone nel piatto con le cellule batteriche, con il lato inferiore rivolto verso il basso, facendo scorrere una spatola angolata di 90 gradi sotto il tampone e posizionandola sopra il vetrino coprioggetto inoculato. Utilizzare la spatola per far sì che il tampone sia a filo con il vetrino coprioggetti e spingere delicatamente per eliminare eventuali bolle d'aria.
Rimuovere l'umidità in eccesso dalla salvietta umida e posizionarla attorno al bordo del piatto, assicurandosi che non tocchi il pad. Il campione è ora pronto per l'imaging.