Valutazione dell'effetto dei batteri benefici sulla traslocazione microbica intestinale nei ratti stressati da calore

Iniziare con un ratto sperimentale pretrattato con batteri benefici e un ratto di controllo a cui è stata somministrata soluzione salina tamponata con fosfato o PBS.

Esporre entrambi i ratti ad alte temperature per indurre stress fisiologico.

Nel ratto di controllo, lo stress da calore interrompe la barriera epiteliale intestinale, consentendo ai batteri derivati dall'intestino di traslocare e diffondersi negli organi interni.

Tuttavia, nei ratti sperimentali, i batteri benefici rilasciano molecole di segnalazione che preservano le giunzioni epiteliali e riducono la traslocazione batterica.

Prelevare le provette contenenti i campioni di fegato prelevati da ciascun ratto.

Aggiungere PBS e omogeneizzare i campioni per rilasciare i batteri nel tampone.

Distribuire l'omogeneizzato diluito su piastre di agar ricche di sostanze nutritive.

Incubare le piastre per consentire la formazione di colonie batteriche. Quindi, conta le colonie.

Un numero più elevato di colonie nel campione di controllo indica la rottura della barriera intestinale e la traslocazione batterica.

Al contrario, un minor numero di colonie nel campione sperimentale indica l'effetto dei batteri benefici nel limitare la traslocazione batterica nell'intestino.

Dopo aver trattato i ratti mediante sonda gastrica orale con B.subtilis BSB3 o PBS per due giorni, quindi suddividendo gli animali e misurando la loro temperatura, tenere i ratti dei gruppi uno e due a temperatura ambiente per 25 minuti. Porre gli animali dei gruppi tre e quattro in una camera climatica a 45 gradi Celsius e 55% di umidità relativa per 25 minuti.

Quindi, dopo l'eutanasia degli animali, la raccolta del sangue del tronco e l'isolamento degli organi secondo il protocollo di testo, aggiungere PBS sterile a ciascuna provetta per ottenere una diluizione da uno a dieci pesi per volume del campione e utilizzare un omogeneizzatore di tessuto di vetro sterile per generare sospensioni tissutali omogenee.

Successivamente, utilizzare PBS sterile per effettuare diluizioni seriali di ciascun campione. Quindi, piastrate 0,1 millilitri di tutte le diluizioni sulla superficie di agar di MacConkey e 5% di sangue e di agar sanguigno Brucella con emina e vitamina K1. Dopo aver incubato le piastre, usa un contatore di colonie per contare le colonie su ogni gruppo di piastre.