JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscience
0 visualizzazioni • 2:26 min. • July 8th, 2025
Prendiamo i neuroni indotti dall'uomo, o iNs, coltivati su una matrice extracellulare.
Rimuovi i terreni e aggiungi enzimi digestivi che interrompono la matrice, dissociando le cellule.
Trasferire gli iN in una provetta. Centrifugare la sospensione ed eliminare il surnatante contenente gli enzimi.
Risospendere gli iN in un terreno di co-coltura; trasferirli su una coltura di cellule precursori degli oligodendrociti indotte, o iOPC.
Gli iOPC sono precursori degli oligodendrociti che formano guaine mieliniche attorno agli assoni dei neuroni.
Dopo l'incubazione, gli iOPC formano connessioni sinaptiche con gli iNs. I fattori trofici rilasciati dalle iOPC e i fattori di crescita nel mezzo promuovono la maturazione delle iN nei neuroni, mostrando un aumento dei processi cellulari che formano connessioni sinaptiche con altri neuroni.
L'attività elettrica dei neuroni maturi e dei fattori di crescita nel mezzo induce la maturazione di iOPC in oligodendrociti.
Gli oligodendrociti estendono i processi cellulari, formando guaine mieliniche attorno agli assoni neuronali.
La co-cultura stabilita è pronta per l'analisi.
Il giorno 14, piastre iOPC a una densità di 1 x 105 celle per pozzetto in una piastra a 24 pozzetti in mezzo di differenziazione OPC. Il giorno successivo, staccare i neuroni umani indotti con una soluzione di distacco cellulare. Aggiungere neuroni sulle OPC in coltura, placcando alla densità di seduta di 2 x 105 cellule per pozzetto. Utilizzare un terreno di co-coltura contenente terreno A neurobasale, integratore di B-27 al 2% e 100 nanogrammi per millilitro di triiodotironina T3. Cambia il mezzo il giorno successivo e poi a giorni alterni. Se gli OPC proliferano troppo velocemente e raggiungono la confluenza in meno di tre giorni, aggiungere da 2 a 5 micromolari di Ara-C.