JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscience
0 visualizzazioni • 2:16 min. • July 8th, 2025
Inizia con una piastra di coltura rivestita con un polimero sintetico e una proteina di adesione.
Aggiungere cellule progenitrici neurali del midollo spinale risospese in un mezzo di differenziazione dei motoneuroni, integrato con un inibitore di piccole molecole.
La superficie della piastra rivestita facilita l'adesione delle cellule.
L'inibitore a piccola molecola blocca specifiche protein chinasi, prevenendo l'apoptosi cellulare.
Rimuovere il terreno esaurito e aggiungere un nuovo mezzo di differenziazione.
Il terreno contiene un composto che promuove la differenziazione dei progenitori neurali in progenitori dei motoneuroni.
Inoltre, emergono progenitori gliali impegnati.
Successivamente, sostituire con un mezzo di differenziazione integrato con un inibitore della sintesi del DNA.
Questi inibitori inducono selettivamente il danno al DNA e la morte nei progenitori gliali, mentre i progenitori dei motoneuroni si differenziano in neuroni maturi.
Lavare le cellule con tampone e aggiungere il mezzo di differenziazione senza inibitori per mantenere i neuroni.
Durante la coltivazione, sostituire regolarmente il terreno per reintegrare i nutrienti.
Inoltre, sostituire il terreno con un terreno integrato con proteine di adesione per migliorare l'attaccamento neuronale, stabilendo una coltura omogenea del motoneurone.
Se le colture di cellule progenitrici neurali sono state congelate, scongelarle. Dopo lo scambio del terreno e il risciacquo con PBS come descritto nel manoscritto, sostituire il terreno con un mezzo di differenziazione del motoneurone contenente 0,02 micromolari di citosina arabinoside.
Quindi, incubare le cellule per 48 ore a 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica quando i progenitori impegnati nella glia emergono come singole cellule piatte proliferanti sotto progenitori di motoneuroni post-mitotici aggregati in gruppi di cellule. Successivamente, eseguire lo scambio del mezzo come indicato nel manoscritto.