JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscience
0 visualizzazioni • 2:01 min. • July 8th, 2025
Prendi una capsula di Petri rivestita di polimero.
Aggiungere il lignaggio degli oligodendrociti o cellule OL a un terreno di coltura adatto e incubare.
La carica positiva sul rivestimento polimerico attrae la membrana cellulare caricata negativamente, migliorando l'adesione delle cellule alla capsula. I fattori di crescita e i nutrienti nel terreno facilitano l'espansione cellulare.
Sostituire il terreno con un terreno povero di sostanze nutritive e incubare.
Bassi livelli di nutrienti inducono un lieve stress nelle cellule, inducendole a secernere proteine, lipidi e altre molecole, inclusi fattori di crescita e citochine, nello spazio extracellulare.
Raccogli il mezzo in un tubo.
Il filtro sterilizza il mezzo per rimuovere i detriti cellulari e i componenti insolubili.
Il filtrato contenente le molecole bioattive solubili secrete dalle cellule OL è chiamato terreno condizionato con oligodendrociti o OCM.
Conservare l'OCM a temperature più basse fino a un ulteriore utilizzo per prevenire la degradazione di proteine e altre molecole, preservando così l'efficacia dell'OCM.
Piastra due o tre piastre di Petri pre-rivestite da 100 millimetri con 10 millilitri di sospensione cellulare.
Incubare in un incubatore umidificato a 37 gradi Celsius sotto il 5% di anidride carbonica.
In una cappa a flusso laminare in condizioni sterili, rinnovare il terreno di coltura con 10 millilitri di terreno caldo Mbb 27 basso.
Incubare per 2 giorni in un incubatore umidificato a 37 gradi Celsius sotto il 5% di anidride carbonica.
Per raccogliere l'OCM, raccogliere il surnatante contenente fattori secreti dagli oligodendrociti. Sterilizzare con filtro l'OCM utilizzando un filtro da 0,22 micron.