JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscience
0 visualizzazioni • 2:08 min. • July 8th, 2025
In una piastra di coltura, rivestire un vetrino coprioggetti con poliornitina, un polimero caricato positivamente, e incubare.
La poliornitina forma uno strato simile a una rete che aiuta le cellule caricate negativamente ad aderire al vetrino.
Rimuovere la soluzione e lavare i vetrini coprioggetti con una soluzione salina tamponata per rimuovere la poliornitina non legata.
Aggiungere una soluzione contenente una proteina della matrice extracellulare chiamata laminina e incubare.
La laminina forma una matrice sopra il vetrino coprioggetti rivestito di poliornitina, migliorando l'adesione delle cellule.
Scartare la soluzione e prelevare un piccolo numero di cellule staminali neurali sospese in un terreno privo di fattore di crescita.
Aggiungere questa coltura a bassa densità sul vetrino coprioggetti preparato con un lento movimento rotatorio per distribuire uniformemente le cellule.
Inizialmente, la privazione del fattore di crescita promuove la divisione cellulare.
Nel corso del tempo, le cellule staminali si differenziano in neuroni con lunghe proiezioni
Alla fine, i neuroni producono strutture simili a spine sulle loro proiezioni, come i neuroni piramidali corticali.
Per preparare le colture neuronali, posizionare i vetrini coprioggetti in piastre di coltura a sei pozzetti e aggiungere la poliornitina. Incubare per una notte sotto una cappa a flusso. Il giorno seguente, utilizzare DPBS per lavare i vetrini coprioggetti tre volte e aggiungere laminina. Incubare sotto una cappa a flusso per almeno 10 ore.
Preparare il terreno di coltura contenente i seguenti componenti. Quindi, utilizzare il terreno per piastrare e inviare cellule staminali neurali o NSC a una densità di 50.000 cellule per centimetro quadrato, pipettando con movimenti rotatori lenti per ridurre l'aggregazione cellulare.