Ottenere fette orizzontali di cervello ippocampale di topo

Prendi gli emisferi cerebrali del topo in una soluzione ad alto contenuto di saccarosio. Fissare gli emisferi con il lato ventrale rivolto verso l'alto su una piastra del campione di vibratomo utilizzando un adesivo.

Trasferire la piastra del campione nella camera di affettamento.

Aggiungere una soluzione semi-congelata ad alto contenuto di saccarosio per mantenere le condizioni fisiologiche del tessuto e solidificare l'adesivo.

Fornire una miscela di anidride carbonica e ossigeno per mantenere l'ossigenazione dei tessuti.

Utilizzando i parametri impostati, ottenere le fette iniziali e rimuoverle. Inoltre, ottenere fette orizzontali dell'ippocampo.

Trasferire con cura queste fette di cervello in una camera contenente ACSF per il recupero dei tessuti.

Le fette orizzontali dell'ippocampo sono pronte per ulteriori sperimentazioni.

Posizionare entrambi gli emisferi sul lato dorsale appena tagliato con la parte ventrale del cervello rivolta verso l'alto e posizionare una goccia di supercolla su una piastra per campioni. Usa la punta di una pipetta per stendere la colla in un'area ampia per accogliere entrambi i pezzi di tessuto e tocca un pezzo di cinghia di carta da filtro sul lato ventrale di un emisfero. Utilizzare un'altra cinghia di carta da filtro per semi-asciugare accuratamente il lato dorsale del cervello e posizionare il lato dorsale dell'emisfero verso il basso sulla colla sulla piastra del campione.

Utilizzare due cinghie di carta da filtro aggiuntive per posizionare il secondo emisfero sulla colla come appena dimostrato e posizionare la piastra del campione nella camera di affettatura. Quindi, rapidamente ma con attenzione, coprire il piatto con una granita ghiacciata ad alto contenuto di saccarosio. Per acquisire sezioni del tessuto cerebrale, posizionare la lama del vibratomo davanti al lato mediale degli emisferi e sollevare la tavola del vibratomo in modo che la lama si trovi alla stessa altezza dei lati ventrali degli emisferi, che ora sono rivolti verso l'alto.

Usa il controllo del vibratomo per abbassare la lama di 600 micron in direzione dorsale e affetta il tessuto fino a quando le prime due fette non sono completamente separate dai due emisferi. Quando le prime due fette di tessuto sono state ottenute, invertire il senso di taglio e abbassare la lama di altri 300 micron prima di affettare nuovamente. Quando l'ippocampo diventa visibile, utilizzare una pipetta di plastica Pasteur allargata per raccogliere e trasferire le fette nella camera di recupero a bagnomaria.