Generazione di fette di corteccia cingolata mediale al talamo anteriore da cervelli di topo

Inizia con una testa di topo mozzata. Rimuovere la pelle per esporre il cranio e aprire il cranio per accedere al cervello.

Rimuovere i bulbi olfattivi e recidere tutte le connessioni nervose per estrarre il cervello nel liquido cerebrospinale artificiale ossigenato ghiacciato, o aCSF.

Prendi il cervello e fai due tagli verticali su ciascuna metà per esporre l'anatomia interna.

Eseguire due tagli angolati per isolare la regione contenente il talamo mediale-corteccia cingolata anteriore o la via MT-ACC. La MT, una parte del talamo, agisce come una stazione di trasmissione attraverso proiezioni neuronali che si estendono all'ACC nella corteccia frontale.

Fissare il cervello su una piastra angolata usando un adesivo, fare un taglio per aprire il cervello ed esporre il percorso, quindi attaccarlo a un tavolino per campioni di vibratomo.

Posiziona il tavolino nel vibratomo, aggiungi un buffer e genera sezioni contenenti il percorso MT-ACC.

Mantenere le fette di cervello in un flusso continuo di aCSF ossigenato per mantenere la loro vitalità.

Esponi il cranio dell'animale e taglia il muscolo rimanente. Quindi, stacca la superficie dorsale del cranio usando i rongeur e taglia via i lati. Successivamente, utilizzando una spatola, tagliare i bulbi olfattivi e le connessioni nervose lungo la superficie ventrale del cervello prima di rimuoverlo.

Trasferisci rapidamente il cervello in un becher riempito con ACSF ossigenato ghiacciato. Per preparare le fette contenenti il percorso MT-ACC, eseguire un taglio sagittale di 2 millimetri lateralmente alla linea mediana in ciascun emisfero per visualizzare l'anatomia sottocorticale.

Quindi, fai un taglio trasversale angolato parallelo al tratto di fibra visibile nello striato. Eseguire il secondo taglio trasversale angolato dalla connessione tra il cervelletto e la corteccia visiva, fino al punto medio tra la commessura anteriore e il tratto ottico che sono ventrali e paralleli alla via del cingolato del talamo. Successivamente, attacca il blocco cerebrale a una piastra angolare con un adesivo cianoacrilato.

Fai un taglio appena sopra il punto di svolta del percorso. Dopodiché, apri la piastra, appiattiscila e incollala sul tavolino da camera di un vibratomo. Successivamente, sezionare le fette di cervello a 500 micrometri di spessore e conservarle in ACSF ossigenato ghiacciato. Trasferire una fetta nella camera di registrazione a 32 gradi Celsius con perfusione continua di ACSF ossigenato per un'ora.