JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscience
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Inizia con un topo anestetizzato con encefalomielite autoimmune sperimentale o EAE. Questa condizione provoca infiammazione agli occhi e al cervello.
Posizionare il mouse in un apparecchio di imaging, allineando la parte superiore della schiena al centro.
Coprire la parte inferiore del mouse con un panno nero per evitare interferenze di segnale da questa regione.
Utilizzare il software di imaging per registrare la posizione del mouse.
Prendere una siringa riempita con un reagente contenente il substrato bioluminescente e iniettarla per via intraperitoneale nel topo.
Il reagente circola ed entra nel sito di infiammazione, dove il substrato interagisce con gli enzimi specifici dell'infiammazione.
La reazione enzima-substrato produce un segnale bioluminescente.
Acquisisci immagini a intervalli di tempo regolari per monitorare questo segnale.
Il nervo ottico si trova vicino alla superficie, rendendo prominente la bioluminescenza intorno agli occhi. Al contrario, i segnali provenienti dal cervello sono deboli poiché il cranio assorbe la luce emessa.
Nell'immagine, il blu indica un'infiammazione lieve e il rosso indica un'infiammazione grave.
Per eseguire l'imaging in vivo, mantenere i topi sotto anestesia con isoflurano dal 2 al 2,5% durante tutte le procedure di imaging. Posiziona due topi uno accanto all'altro nell'apparecchio e posiziona le spine superiori dei topi al centro.
Quindi, proteggi il sito di immunizzazione con un panno nero. Aprire il software per l'acquisizione delle immagini e inizializzare la fotocamera. Quindi, scatta un'immagine di base per valutare il corretto posizionamento dei topi.
Successivamente, utilizzare la messa a fuoco B con una distanza di 6,5 centimetri dalla fotocamera per catturare tutte le immagini. Successivamente, mescolare il reagente chemiluminescente pronto all'uso a 40 milligrammi per millilitro prima di riempire la siringa. Quindi, iniettarne 100 microlitri nei topi per via intraperitoneale e acquisire le immagini di bioluminescenza 5, 10 e 15 minuti dopo l'iniezione.