JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscience
0 visualizzazioni • 2:29 min. • August 7th, 2025
Prendi un topo anestetizzato con un monofilamento inserito nella sua arteria cerebrale media per indurre l'occlusione.
Questo blocca il flusso sanguigno al cervello, innescando l'ischemia focale.
L'occlusione limita l'apporto di ossigeno e glucosio, causando la deplezione di ATP e la depolarizzazione neuronale.
I neuroni depolarizzati rilasciano un eccesso di glutammato, che si lega ai recettori postsinaptici, causando un massiccio afflusso di calcio.
L'elevato calcio intracellulare interrompe la funzione mitocondriale e promuove la produzione di ROS, avviando il danno neuronale.
Anestetizzare nuovamente il topo.
Riaprire l'incisione e rimuovere il monofilamento per ottenere la riperfusione.
L'improvvisa reintroduzione dell'ossigeno genera un eccesso di ROS dai mitocondri disfunzionali, peggiorando il danno neuronale.
Per mitigare questo problema, esporre il topo a una miscela di gas ad alto contenuto di anidride carbonica per il postcondizionamento acido o APC dopo l'inizio della riperfusione.
Ciò aumenta la concentrazione di protoni nel cervello, inibendo i recettori, riducendo l'afflusso di calcio e prevenendo l'eccitotossicità mediata dal calcio.
Inoltre, l'APC stabilizza i mitocondri e inibisce la produzione di ROS, fornendo così neuroprotezione.
55 minuti dopo l'inizio dell'occlusione, anestetizzare nuovamente l'animale con isoflurano e posizionare l'animale come prima. Quindi aprire l'incisione del collo e riesporre l'arteria carotide comune. Dopo il periodo di occlusione, utilizzare una pinza oftalmica per estrarre delicatamente il filamento per ottenere la riperfusione. Quindi trasforma la sutura temporanea in una permanente stringendo il nodo. Per il trattamento dell'acidosi, cambiare il gas inalato dal cono anteriore al 20% di anidride carbonica, al 20% di ossigeno e al 60% di azoto per cinque minuti. Dopo aver chiuso l'incisione con una sutura chirurgica interrotta, posizionare il topo in una gabbia riscaldata a 30 gradi Celsius fino a quando il topo non riprende conoscenza.