JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscience
0 visualizzazioni • 2:52 min. • August 7th, 2025
Posizionare un topo in una camera di induzione sigillata collegata a un ingresso per l'erogazione controllata di ossigeno.
Esponilo a cicli di bassi livelli di ossigeno fluttuanti, chiamati precondizionamento ipossico ripetitivo o RHP.
Ad ogni ciclo di ossigeno ridotto, i livelli di ossigeno nel sangue del topo diminuiscono, creando uno stato ipossico.
Alcuni neuroni nel cervello si adattano gradualmente, regolando il loro metabolismo per sopravvivere in un ambiente a basso contenuto di ossigeno.
La barriera emato-encefalica, che protegge il cervello, rimane stabile e previene l'infiammazione cerebrale.
Rimuovere il mouse dalla camera e consentire il recupero. Quindi, indurre un ictus ischemico bloccando l'arteria cerebrale media.
Ciò impedisce al sangue ricco di ossigeno di raggiungere il cervello, sottoponendo i neuroni a uno stress estremo.
La barriera emato-encefalica viene interrotta, innescando l'infiammazione.
Tuttavia, i neuroni addestrati con RHP sono meglio adattati a condizioni di basso contenuto di ossigeno, rendendoli più resistenti ai danni e preservando la loro funzione.
Ciò suggerisce che l'RHP aiuta i neuroni ad adattarsi e riduce il danno cerebrale causato dall'ictus ischemico e dalla privazione di ossigeno.
Per iniziare, dividi i topi in due gruppi, il gruppo RHP, che riceve esposizioni dell'8% e dell'11% di ossigeno, e il gruppo di controllo, che riceve esposizioni del 21% di ossigeno contemporaneamente. Rimuovere il coperchio superiore del filtro di ciascuna gabbia e posizionare la gabbia con le bottiglie di cibo e acqua intatte nelle camere collegate alle rispettive bombole di ossigeno. Chiudere e fissare il coperchio della camera.
Aprire la valvola principale del gas per i serbatoi e impostare il flusso iniziale per ciascuna camera di induzione a 2 litri al minuto, o LPM. Dopo cinque minuti di esposizione, ridurre la portata a 1 LPM per il resto dell'esposizione. Al termine dell'esposizione, ridurre la portata a zero LPM, e chiudere la valvola del gas per i serbatoi.
Aprire i coperchi della camera e riposizionare il coperchio superiore del filtro su ciascuna gabbia. Posizionare le gabbie in stabulazione standard fino alla successiva esposizione ipossica. Spruzzare su ogni camera di induzione un disinfettante e un deodorante dopo ogni utilizzo.
Esporre sia i topi RHP che quelli di controllo alla stessa ora del giorno nel corso delle due settimane del protocollo. Quindi eseguire un'occlusione transitoria dell'arteria cerebrale media, o TMCAO, come descritto nel testo.