Name: Disegni microfluidici di laminazione in polietilene tereftalato a basso costo per limaging multiplexato di zebrafish (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-27T14:45:00.000+00:00
Duration: 5 min 48 s
Description: Scopri la laminazione microfluidica in PET a basso costo per l'imaging multiplexato di embrioni di zebrafish. Questo metodo consente di studiare l'infiammazione e la guarigione delle ferite con alta risoluzione spaziale.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>De Oliveira, S., Rosowski, E. E., Huttenlocher, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+migration+in+infection+and+wound+repair%3A+going+forward+in+reverse%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutrophil migration in infection and wound repair: going forward in reverse.</a> Nat Rev Immunol. 16 (6), 378-391 (2016).</li>
<li>Xu, S., Hsiao, T. I., Chisholm, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+wounded+worm%5BTitle%5D)+AND+%22Worm%22%5BJournal%5D)">The wounded worm.</a> Worm. 1 (2), 134-138 (2012).</li>
<li>Belacortu, Y., Paricio, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+as+a+model+of+wound+healing+and+tissue+regeneration+in+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Drosophila as a model of wound healing and tissue regeneration in vertebrates.</a> Dev Dyn. 240 (11), 2379-2404 (2011).</li>
<li>Yoo, S. K., Freisinger, C. M., LeBert, D. C., Huttenlocher, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+redox%2C+Src+family+kinase%2C+and+calcium+signaling+integrate+wound+responses+and+tissue+regeneration+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Early redox, Src family kinase, and calcium signaling integrate wound responses and tissue regeneration in zebrafish.</a> J Cell Biol. 199 (2), 225-234 (2012).</li>
<li>Kawakami, A., Fukazawa, T., Takeda, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+fin+primordia+of+zebrafish+larvae+regenerate+by+a+similar+growth+control+mechanism+with+adult+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Early fin primordia of zebrafish larvae regenerate by a similar growth control mechanism with adult regeneration.</a> Dev Dyn. 231 (4), 693-699 (2004).</li>
<li>Gault, W. J., Enyedi, B., Niethammer, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osmotic+surveillance+mediates+rapid+wound+closure+through+nucleotide+release%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Osmotic surveillance mediates rapid wound closure through nucleotide release.</a> J Cell Biol. 207 (6), 767-782 (2014).</li>
<li>Huemer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((zWEDGI%3A+Wounding+and+entrapment+device+for+imaging+live+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">zWEDGI: Wounding and entrapment device for imaging live zebrafish larvae.</a> Zebrafish. 14 (1), 42-50 (2017).</li>
<li>Kaufmann, A., Mickoleit, M., Weber, M., Huisken, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multilayer+mounting+enables+long-term+imaging+of+zebrafish+development+in+a+light+sheet+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Multilayer mounting enables long-term imaging of zebrafish development in a light sheet microscope.</a> Development. 139 (17), 3242-3247 (2012).</li>
<li>Hirsinger, E., Steventon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+versatile+mounting+method+for+long+term+imaging+of+zebrafish+development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A versatile mounting method for long term imaging of zebrafish development.</a> J Vis Exp. (119), e55210(2017).</li>
<li>Wielhouwer, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+embryo+development+in+a+microfluidic+flow-through+system%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Zebrafish embryo development in a microfluidic flow-through system.</a> Lab Chip. 11 (10), 1815-1824 (2011).</li>
<li>Khalili, A., Rezai, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+devices+for+embryonic+and+larval+zebrafish+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Brief+Funct+Genomics%22%5BJournal%5D)">Microfluidic devices for embryonic and larval zebrafish studies.</a> Brief Funct Genomics. 18 (6), 419-432 (2019).</li>
<li>Choudhury, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fish+and+Chips%3A+a+microfluidic+perfusion+platform+for+monitoring+zebrafish+development%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Fish and Chips: a microfluidic perfusion platform for monitoring zebrafish development.</a> Lab Chip. 12 (5), 892-900 (2012).</li>
<li>An integrated microfluidic system for zebrafish larva organs injection. Zhang, G., et al. Proceedings IECON 2017 - 43rd Annual Conference of the IEEE Industrial Electronics Society, 2017-January, , 8563-8566 (2017).</li>
<li>Erickstad, M., Hale, L. A., Chalasani, S. H., Groisman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microfluidic+system+for+studying+the+behavior+of+zebrafish+larvae+under+acute+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">A microfluidic system for studying the behavior of zebrafish larvae under acute hypoxia.</a> Lab Chip. 15 (3), 857-866 (2015).</li>
<li>Mani, K., Hsieh, Y. C., Panigrahi, B., Chen, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+noninvasive+light+driven+technique+integrated+microfluidics+for+zebrafish+larvae+transportation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomicrofluidics%22%5BJournal%5D)">A noninvasive light driven technique integrated microfluidics for zebrafish larvae transportation.</a> Biomicrofluidics. 12 (2), 021101(2018).</li>
<li>Lee, Y., Seo, H. W., Lee, K. J., Jang, J. W., Kim, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microfluidic+system+for+stable+and+continuous+EEG+monitoring+from+multiple+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">A microfluidic system for stable and continuous EEG monitoring from multiple larval zebrafish.</a> Sensors (Basel). 20 (20), 5903(2020).</li>
<li>Sonnen, K. F., Merten, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidics+as+an+emerging+precision+tool+in+developmental+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Microfluidics as an emerging precision tool in developmental biology.</a> Dev Cell. 48 (3), 293-311 (2019).</li>
<li>Levis, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidics+on+the+fly%3A+Inexpensive+rapid+fabrication+of+thermally+laminated+microfluidic+devices+for+live+imaging+and+multimodal+perturbations+of+multicellular+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Biomicrofluidics%22%5BJournal%5D)">Microfluidics on the fly: Inexpensive rapid fabrication of thermally laminated microfluidic devices for live imaging and multimodal perturbations of multicellular systems.</a> Biomicrofluidics. 13 (2), 024111(2019).</li>
<li>E3 medium (for zebrafish embryos). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22">Cold Spring Harbor Protocols</a>. 2011 (10), (2011).</li>
<li>Matthews, M., Varga, Z. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthesia+and+euthanasia+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Anesthesia and euthanasia in zebrafish.</a> ILAR J. 53 (2), 192-204 (2012).</li>
<li>Cronan, M. R., Tobin, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endogenous+tagging+at+the+cdh1+locus+for+live+visualization+of+E-cadherin+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Endogenous tagging at the cdh1 locus for live visualization of E-cadherin dynamics.</a> Zebrafish. 16 (3), 324(2019).</li>
<li>Thiele, T. R., Donovan, J. C., Baier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Descending+control+of+swim+posture+by+a+midbrain+nucleus+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Descending control of swim posture by a midbrain nucleus in zebrafish.</a> Neuron. 83 (3), 679-691 (2014).</li>
<li>Yoo, S. K., Huttenlocher, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+photolabeling+of+neutrophil+trafficking+during+inflammation+in+live+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal photolabeling of neutrophil trafficking during inflammation in live zebrafish.</a> J Leukoc Biol. 89 (5), 661-667 (2011).</li>
<li>Chen, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasensitive+fluorescent+proteins+for+imaging+neuronal+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ultrasensitive fluorescent proteins for imaging neuronal activity.</a> Nature. 499 (7458), 295-300 (2013).</li>
<li>Li, L., Yan, B., Shi, Y. -Q., Zhang, W. -Q., Wen, Z. -L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+reveals+differing+roles+of+macrophages+and+neutrophils+during+zebrafish+tail+fin+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Live imaging reveals differing roles of macrophages and neutrophils during zebrafish tail fin regeneration.</a> J Biol Chem. 287 (30), 25353-25360 (2012).</li>
<li>Mathias, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolution+of+inflammation+by+retrograde+chemotaxis+of+neutrophils+in+transgenic+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Resolution of inflammation by retrograde chemotaxis of neutrophils in transgenic zebrafish.</a> J Leukoc Biol. 80, 1281-1288 (2006).</li>
<li>Levis, M., Ontiveros, F., Juan, J., Kavanagh, A., Zartman, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+fabrication+of+custom+microfluidic+devices+for+research+and+educational+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Rapid fabrication of custom microfluidic devices for research and educational applications.</a> J Vis Exp. 2019, (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Vetro di copertura rotondo da 25 mm di diametro #1 spessore</td><td>Chemglass Life Sciences</td><td>CLS-1760-025</td><td>Materiale di montaggio della base. Lo spessore è stato scelto in base alle specifiche della lente del microscopio.</td></tr><tr><td>Adobe Illustrator v28.5</td><td>Adobe</td><td>N/A</td><td>Editor vettoriale per la progettazione del modello del dispositivo.</td></tr><tr><td>Cloruro di calcio diidrato</td><td>Fisher</td><td>C79</td><td>Per fare il terreno E3</td></tr>.<tr><td>Design PNG Files (Online Mirror)</td><td>N/A</td><td>N/A</td> https://i.ibb.co/QPYj7BL/multipositionalv7-1.png<<td>br/> https://i.ibb.co/FDpQYXc/multipositionalv7-2.png https://i.ibb.co/5TG4SB6/multipositionalv7-3.png</td></tr><tr><td>Design Space for Desktop v8.39</td><td>Cricut</td><td>N/A</td><td>Software proprietario per guidare il cutter artigianale.</td></tr><tr><td>Fusion Plus 7000L</td><td>GBC</td><td>1703098</td><td>Laminatore termico. Questo modello specifico è stato selezionato per le caratteristiche di qualità della vita, come la dimensione massima della pila di fogli.</td></tr><tr><td>Lama premium in carburo tedesco</td><td>Cricut</td><td>10396595</td><td>Lama di ricambio per taglierina artigianale.</td></tr><tr><td>Set di strumenti di base grigio</td><td>Cricut</td><td>10307854</td><td>Set di strumenti per tagli da diserbo, tappetini per la pulizia e il montaggio di fogli in PET. Facoltativo.</td></tr><tr><td>Cloruro di magnesio esaidrato</td><td>Acros 223211000 organico</td><td></td><td>Per fare E3 medium.</td></tr><tr><td>Maker 3</td><td>Cricut</td><td>10669040</td><td>Taglierina artigianale. La Cricut Maker 3 è stata scelta rispetto alla Silhouette Cameo 4 per la facilità d'uso del software, ma qualsiasi taglierina artigianale in grado di leggere immagini in bianco e nero funzionerà.</td></tr><tr><td>MemGlow 560</td><td>Citoscheletro</td><td>MG02-10</td><td>Colorante a cellule vive rosse per membrane cellulari. Non è necessario alcun lavaggio. Utilizzato nella Figura 3.</td></tr><tr><td>N. 22 Lama per bisturi in carbonio</td><td>Design chirurgico</td><td> 22-079-697</td><td>Lama per bisturi per regolazioni manuali del taglio. Funzionerà anche qualsiasi coltello artigianale simile (ad esempio, il coltello X-acto #2).</td></tr><tr><td>Cloruro di potassio</td><td>Fisher</td><td>BP366</td><td>Per fare E3 medio.</td></tr><tr><td>Cloruro di sodio</td><td>Fisher</td><td>BP358</td><td>Per la produzione di terreno E3</td></tr>.<tr><td>Tappetino da taglio adesivo StandardGrip</td><td>Cricut</td><td>10138842</td><td>Tappetino di montaggio per taglierina artigianale. Anche il tappetino da taglio LightGrip funzionerà, ma evita i tappetini da taglio StrongGrip e FabricGrip poiché la forza dell'adesivo potrebbe deformare il taglio finale durante il diserbo e la rimozione. L'adesivo sui tappetini alla fine si consumerà con l'uso continuato; Sostituire i tappetini secondo necessità.</td></tr><tr><td>Nastro adesivo 12 mm</td><td>Deli</td><td>30014</td><td>Nastro per ufficio. Il marchio di gastronomia è stato scelto tramite test per la facilità di rimozione dopo la laminazione.</td></tr><tr><td>Super colla,</td><td>Loctite</td><td></td><td>liquida 1364076 Colla cianoacrilica. <forte>La colla utilizzata deve essere liquida.</forte> Le formulazioni in gel non sigillano o impermeabilizzano sufficientemente i bordi del dispositivo.</td></tr><tr><td>Buste di laminazione termica in PET,</td> fogli in PET <td>Scotch</td><td>TP3854</td> da 3 mil <td>con adesivo termico. Le lenzuola arrivano a coppie e devono essere separate prima dell'uso. Tagliare con il lato adesivo rivolto verso il basso.</td></tr><tr><td>Buste di laminazione termica in PET,</td> fogli in PET <td>Scotch</td><td>TP5854</td> da 5 mil <td>con adesivo termico. Le lenzuola arrivano a coppie e devono essere separate prima dell'uso. Tagliare con il lato adesivo rivolto verso il basso.</td></tr><tr><td>Tricaina (MS-222)</td><td>Syndel</td><td>IC10310680</td><td>Anestetico per pesci.</td></tr></tbody></table>

disegni microfluidici di laminazione in polietilene tereftalato a basso costo per l'imaging multiplexato di zebrafish

Low-cost Polyethylene Terephthalate Lamination Microfluidics Designs for Multiplexed Zebrafish Imaging

Per il confronto della qualità dell'immagine prodotta da un confocale a scansione laser con e senza l'ausilio del RADISH, gli embrioni che esprimono il biosensore intensiometrico di calcio GCaMP6f22,24 nello strato epiteliale esterno sono stati colorati utilizzando MemGlow 560 e riprodotti con un confocale a scansione laser invertita che copre l'intero spessore della piega della pinna caudale a un intervallo di tempo di 1 minuto per fotogramma (Video 2). Senza il dispositivo (Figura 3A), i campioni si spostavano in modo significativo e mostravano artefatti di bande, derivanti dalla limitazione dello Z-stack a 25 fette per adattarsi alla risoluzione temporale specificata rispetto all'imaging con il dispositivo (Figura 3B). Il RADISH è stato inoltre utilizzato per esaminare i transitori di calcio immediatamente dopo la ferita negli embrioni che esprimono Tg(krt4:Gal4, UAS:GCaMP6f) x (cdh1-dTomato)xt1821, evidenziando la E-caderina endogena in rosso e il calcio citoplasmatico nell'epitelio apicale in verde. Gli embrioni sono stati feriti parallelamente ai lati della camera centrale utilizzando una lama di bisturi (Figura 4A e Video 3) o mediante ablazione laser diretta con un laser IR (Figura 4B), quindi ripresi attraverso l'intero spessore della piega della pinna caudale. 
Per dimostrare l'efficacia del RAVANELLO per l'imaging a lungo termine, abbiamo studiato il reclutamento delle cellule immunitarie sul bordo della ferita per 24 ore dopo la ferita. Quattro embrioni di zebrafish a 3 dpf che esprimono Tol2 (mpx:Dendra2) per marcare i neutrofili in verde23 sono stati feriti mediante transsezione della coda e sottoposti a imaging per 24 ore consecutive (Figura 5). Gli artefatti di imaging tipicamente associati agli embrioni tardivi da 3 dpf a 4 dpf, come l'inclinazione e il galleggiamento, erano notevolmente assenti (Video 4) e la ricrescita dei tessuti è continuata senza ostacoli per l'esperimento. Il reclutamento dei neutrofili sul bordo della ferita continua per tutta l'immagine (Figura 5B), con la maggior parte delle cellule in migrazione che se ne vanno entro 24 ore dalla ferita (Figura 5C), in linea con la risoluzione dell'infiammazione prevista25,26.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67313/67313fig01.jpg"> 
Figura 1: Progettazione e utilizzo del dispositivo microfluidico in laminato PET (RADISH). (A) Schema che illustra la disposizione e lo spessore dei singoli strati di PET, l'assemblaggio, il montaggio e l'uso del dispositivo. (B) Prodotto finale, montato in un ritaglio da 3/4" in un piatto da 35 mm. (C) 3 embrioni dpf, (D) 5 embrioni dpf, (E) 14 embrioni dpf alloggiati all'interno del dispositivo. Barre di scala = 1.000 μm (C,D,E). Abbreviazioni: PET = polietilene tereftalato; RADISH = assistente rotazionale per l'imaging Danio della guarigione successiva; DPF = giorni dopo la fecondazione. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/67313fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67313/67313fig02.jpg"> 
Figura 2: Illustrazione fotografica passo dopo passo dell'assemblaggio del dispositivo in PET. (A) Singoli strati di PET prima della laminazione. (B) Strato di PET fissato al vetrino coprioggetti da 25 mm utilizzando nastro adesivo per ufficio. (C) Dispositivo in corso fissato a un supporto di plastica per la laminazione. (D) Dispositivo laminato in PET completato. (E) Piatto da 35 mm modificato prima del montaggio del dispositivo. (F) Dispositivo completato. Abbreviazione: PET = polietilene tereftalato. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/67313fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67313/67313fig03.jpg"> 
Figura 3: Miglioramento della qualità delle immagini confocali a scansione laser di 3 embrioni dpf nel design RADISH. (A) Immagine rappresentativa di 3 embrioni dpf Tg(krt4:Gal4, UAS:GCaMP6f) colorati con MemGlow 560 senza l'uso del RADISH. (B) Immagine rappresentativa dell'embrione Tg(krt4:Gal4, UAS:GCaMP6f) colorato con MemGlow 560 montato nel RAVANELLO. Barra di scala = 100 μm. Abbreviazioni: RADISH = Assistente rotazionale per l'imaging Danio della guarigione successiva; DPF = giorni dopo la fecondazione. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/67313fig03large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67313/67313fig04.jpg"> 
Figura 4: Compatibilità del design del ravanello con molteplici tecniche di ferimento. (A) 3 dpf Tg(krt4:Gal4, UAS:GCaMP6f) x (cdh1-dTomato)xt18 embrione ferito tramite transezione manuale della pinna caudale. (B) Embrione ferito mediante ablazione laser. (C, D) Gli stessi embrioni 4 minuti dopo, mostrando la progressione dei transitori di calcio dopo la ferita. Barre di scala = 100 μm. Abbreviazioni: RADISH = Assistente rotazionale per l'imaging Danio della guarigione successiva; DPF = giorni dopo la fecondazione. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/67313fig04large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67313/67313fig05.jpg"> 
Figura 5: Intrappolamento a lungo termine di embrioni per l'imaging della migrazione dei fagociti. (A) Gli embrioni Tol2(mpx:Dendra2) immediatamente dopo la ferita e gli stessi embrioni (B) 25 minuti, (C) 12 ore e (D) 24 ore dopo. Barre di scala = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/67313fig05large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
File supplementare 1: file vettoriali e PNG per la progettazione di dispositivi RADISH come mostrato nella Figura 1A. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/67313_Supp%20File%201.zip" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo file.</a>
Video 1: Video in campo chiaro della transezione manuale della pinna caudale utilizzando il design del dispositivo RADISH. Abbreviazione: RADISH = Assistente rotazionale per l'imaging Danio della guarigione successiva. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/Movie%201.mp4" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo video.</a>
Video 2: Confronto tra embrioni Tg(krt4:Gal4, UAS:GCaMP6f) non montati e montati della Figura 3, acquisiti a 1 fotogramma/min. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/Movie%202.mp4" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo video.</a>
Video 3: Transitori di calcio in embrioni Tg(krt4:Gal4, UAS:GCaMP6f) x (cdh1-dTomato)xt18 feriti mediante transezione con bisturi o ablazione laser dalla Figura 4, acquisiti a 1 fotogramma/min. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/Movie%203.mp4" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo video.</a>
Video 4: Imaging a lungo termine del reclutamento leucocitario e della rigenerazione della pinna caudale in embrioni di Tol2(mpx:Dendra2). Abbreviazioni: RADISH = Assistente rotazionale per l'imaging Danio della guarigione successiva; HPW = ore dopo la ferita. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/Movie%204.mp4" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo video.</a>

Disegni microfluidici di laminazione in polietilene tereftalato a basso costo per l'imaging multiplexato di zebrafish

Zebrafish embryos are transparent and thus uniquely suited for noninvasive intravital imaging of fundamental processes, such as wound healing and immune ...

low-cost-polyethylene-terephthalate-lamination-microfluidics-designs

Research

JoVE Journal

Biology

Un semplice dispositivo microfluidico è stato sviluppato per eseguire anestetico...

Semplici dispositivi microfluidici per<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging di<em&gt; C. elegans</em&gt;,<em&gt; Drosophila</em&gt; E Zebrafish

Lo sviluppo di zebrafish può essere seguita nel giorni con microscopio foglio leggero, quando gli embrioni sono inserite in tubi polimerici otticamente trasparenti con bassa concentrazione di agarosio.

Multistrato di montaggio per lungo termine foglio leggero Microscopia di Zebrafish

Qui descritto è un protocollo per l'imaging semi-automatica di fluorescenza tessuto-specifica in embrioni di zebrafish.

Imaging semi-automatico di fluorescenza tessuto-specifica in embrioni di zebrafish

Questo manoscritto descrive la zWEDGI (zebrafish ferire e dispositivo di allettamento per la crescita e la formazione immagine), che è un dispositivo compartimenti progettato per orientare e trattenere le larve di zebrafish. Il design permette di coda transection e a lungo termine raccolta di immagini di microscopia fluorescente ad alta risoluzione di guarigione delle ferite e la rigenerazione.

Dispositivo di Imaging dal vivo a lungo termine per una migliore manipolazione sperimentale delle larve di Zebrafish

Microiniezione di zebrafish embrioni e le larve è una tecnica fondamentale ma impegnativa usata in molti modelli di zebrafish. Qui, presentiamo una gamma di strumenti di Microscala per aiutare nella stabilizzazione e orientamento di zebrafish per microiniezione e di imaging.

Dispositivi microstrutturati Microinjection ottimizzata e Imaging delle larve di Zebrafish

Qui presentiamo un protocollo per progettare e fabbricare dispositivi microfluidici personalizzati con un minimo investimento finanziario e temporale. L'obiettivo è facilitare l'adozione di tecnologie microfluidiche nei laboratori di ricerca biomedica e negli ambienti educativi.

Rapida fabbricazione di dispositivi microfluidici personalizzati per applicazioni di ricerca e didattiche

Questo articolo descrive un metodo per montare fragili embrioni di pesce zebra per la microscopia confocale time-lapse estesa. Questo metodo a basso costo è facile da eseguire utilizzando normali piatti di microscopia con fondo di vetro per l'imaging su qualsiasi microscopio invertito. Il montaggio viene eseguito in strati di agarose a diverse concentrazioni.

Un metodo di montaggio a strati per la microscopia confocale Time-Lapse estesa di embrioni di pesci zebra interi

Descriviamo strumenti ottimizzati per studiare il cuore di zebrafish in vivo con microscopia a fluorescenza a foglio leggero. In particolare, suggeriamo linee transgeniche cardiache luminose e presentiamo nuove delicate tecniche di incorporamento e immobilizzazione che evitano difetti dello sviluppo e cardiaci. Viene inoltre fornita una possibile pipeline di acquisizione e analisi dei dati adattata all'imaging cardiaco.

Microscopia light sheet di dinamiche cardiache veloci in embrioni zebrafish

Questo protocollo utilizza l'imaging a foglio luminoso per studiare la funzione contrattile cardiaca nelle larve di zebrafish e ottenere informazioni sulla meccanica cardiaca attraverso il monitoraggio cellulare e l'analisi interattiva.

Imaging a foglio luminoso 4D della contrazione cardiaca del pesce zebra

Viene descritta una strategia di preparazione del campione per l'imaging di embrioni precoci di zebrafish all'interno di un corion intatto utilizzando un microscopio a foglio luminoso. Analizza i diversi orientamenti che gli embrioni acquisiscono all'interno del corion al 70% degli stadi di epibolia e gemma e descrive in dettaglio le strategie di imaging per ottenere una risoluzione su scala cellulare in tutto l'embrione utilizzando il sistema light-sheet.

Imaging al microscopio a foglio leggero e strategie di montaggio per embrioni precoci di zebrafish

Scopri la laminazione microfluidica in PET a basso costo per l'imaging multiplexato di embrioni di zebrafish. Questo metodo consente di studiare l'infiammazione e la guarigione delle ferite con alta risoluzione spaziale.

Disegni microfluidici di laminazione in polietilene tereftalato a basso costo per l'imaging multiplexato di zebrafish

Esplora altri video