Name: Un modello murino neonatale di enterocolite necrotizzante e isolamento della lamina propria per la profilazione delle cellule immunitarie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T14:40:00.000+00:00
Duration: 9 min 13 s
Description: Scopri un modello murino neonatale di enterocolite necrotizzante e l'isolamento della lamina propria per la profilazione delle cellule immunitarie mediante citometria a flusso. Questo protocollo supporta la ricerca traslazionale sulle terapie per l'NEC.

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<ol><li>Alsaied, A., Islam, N., Thalib, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+incidence+of+necrotizing+enterocolitis%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Pediatr%22%5BJournal%5D)">Global incidence of necrotizing enterocolitis: A systematic review and meta-analysis.</a> BMC Pediatr. 20 (1), 344(2020).</li>
<li>Warner, B. B., Tarr, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necrotizing+enterocolitis+and+preterm+infant+gut+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Fetal+Neonatal+Med%22%5BJournal%5D)">Necrotizing enterocolitis and preterm infant gut bacteria.</a> Semin Fetal Neonatal Med. 21 (6), 394-399 (2016).</li>
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<li>Tanner, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+necrotizing+enterocolitis%3A+Modeling+the+innate+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of necrotizing enterocolitis: Modeling the innate immune response.</a> Am J Pathol. 185 (1), 4-16 (2015).</li>
<li>Leaphart, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+role+for+TLR4+in+the+pathogenesis+of+necrotizing+enterocolitis+by+modulating+intestinal+injury+and+repair1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">A critical role for TLR4 in the pathogenesis of necrotizing enterocolitis by modulating intestinal injury and repair1.</a> J Immunol. 179 (7), 4808-4820 (2007).</li>
<li>Hackam, D. J., Sodhi, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor-mediated+intestinal+inflammatory+imbalance+in+the+pathogenesis+of+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor-mediated intestinal inflammatory imbalance in the pathogenesis of necrotizing enterocolitis.</a> Cell Mol Gastroenterol Hepatol. 6 (2), 229-238.e1 (2018).</li>
<li>Sulistyo, A., Rahman, A., Biouss, G., Antounians, L., Zani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+necrotizing+enterocolitis%3A+Review+of+the+literature+and+state+of+the+art%5BTitle%5D)+AND+%22Innov+Surg+Sci%22%5BJournal%5D)">Animal models of necrotizing enterocolitis: Review of the literature and state of the art.</a> Innov Surg Sci. 3 (2), 87-92 (2018).</li>
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<li>Nolan, L. S., Gong, Q., Hofmeister, H. N., Good, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+the+induction+of+experimental+necrotizing+enterocolitis+in+neonatal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol for the induction of experimental necrotizing enterocolitis in neonatal mice.</a> STAR Protoc. 2 (4), 100951(2021).</li>
<li>Kaplina, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necrotizing+enterocolitis%3A+The+role+of+hypoxia%2C+gut+microbiome%2C+and+microbial+metabolites%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Necrotizing enterocolitis: The role of hypoxia, gut microbiome, and microbial metabolites.</a> Int J Mol Sci. 24 (3), 2471(2023).</li>
<li>Good, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactobacillus+rhamnosus+hn001+decreases+the+severity+of+necrotizing+enterocolitis+in+neonatal+mice+and+preterm+piglets%3A+Evidence+in+mice+for+a+role+of+TLR9%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Lactobacillus rhamnosus hn001 decreases the severity of necrotizing enterocolitis in neonatal mice and preterm piglets: Evidence in mice for a role of TLR9.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 306 (11), G1021-G1032 (2014).</li>
<li>Denning, T. L., Bhatia, A. M., Kane, A. F., Patel, R. M., Denning, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+nec%3A+Role+of+the+innate+and+adaptive+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Perinatol%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of nec: Role of the innate and adaptive immune response.</a> Semin Perinatol. 41 (1), 15-28 (2017).</li>
<li>Yu, Y. -R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+the+comprehensive+flow+cytometric+analysis+of+immune+cells+in+normal+and+inflamed+murine+non-lymphoid+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">A protocol for the comprehensive flow cytometric analysis of immune cells in normal and inflamed murine non-lymphoid tissues.</a> PLOS ONE. 11 (3), e0150606(2016).</li>
<li>Mihi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-22+signaling+attenuates+necrotizing+enterocolitis+by+promoting+epithelial+cell+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep+Med%22%5BJournal%5D)">Interleukin-22 signaling attenuates necrotizing enterocolitis by promoting epithelial cell regeneration.</a> Cell Rep Med. 2 (6), 100320(2021).</li>
<li>Bautista, G. M., Cera, A. J., Chaaban, H., Mcelroy, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((State-of-the-art+review+and+update+of+in+vivo+models+of+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pediatr%22%5BJournal%5D)">State-of-the-art review and update of in vivo models of necrotizing enterocolitis.</a> Front Pediatr. 11, 1161342(2023).</li>
<li>Sodhi, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+milk+oligosaccharides+2%27-fucosyllactose+and+6%27-sialyllactose+protect+against+the+development+of+necrotizing+enterocolitis+by+inhibiting+toll-like+receptor+4+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">The human milk oligosaccharides 2'-fucosyllactose and 6'-sialyllactose protect against the development of necrotizing enterocolitis by inhibiting toll-like receptor 4 signaling.</a> Pediatr Res. 89 (1), 91-101 (2021).</li>
<li>Blum, L., Vincent, D., Boettcher, M., Knopf, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+aspects+of+necrotizing+enterocolitis+models%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunological aspects of necrotizing enterocolitis models: A review.</a> Front Immunol. 15, 1434281(2024).</li>
<li>Nolan, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indole-3-carbinol-dependent+aryl+hydrocarbon+receptor+signaling+attenuates+the+inflammatory+response+in+experimental+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunohorizons%22%5BJournal%5D)">Indole-3-carbinol-dependent aryl hydrocarbon receptor signaling attenuates the inflammatory response in experimental necrotizing enterocolitis.</a> Immunohorizons. 5 (4), 193-209 (2021).</li>
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<li>Booth, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+functional+properties+of+gastric+tissue-resident+memory+T+cells+from+children%2C+adults%2C+and+the+elderly%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Characterization and functional properties of gastric tissue-resident memory T cells from children, adults, and the elderly.</a> Front Immunol. 5, 294(2014).</li>
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<table><tbody><tr><td>1 mL Syringe-Tuberculin Slip Tip</td><td>Becton Dickinson</td><td>309659</td><td>Syringe per alimentazione con formula</td></tr><tr><td>1.5 mL semi-micro Disposable Cuvettes</td><td>BRAND GMBH + CO KG</td><td>759085D</td><td></td></tr><tr><td>1.7 ml Microtubes Clear</td><td>Axygen - Corning Inc.</td><td>MCT-175-C</td><td>Nonpryogenic & Rnase-/Dnase-free</td></tr><tr><td>5% Oxygen, Balance Nitrogen Certified Reference Material, Size 200 High Pressure Steel Cylinger, CGA 580</td><td>Airgas</td><td>X02NI95C2003186</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mo CD16/CD32 Purified Clone: 93</td><td>eBioscience Inc.&nbsp;</td><td>14-0161-85</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mouse CD16/CD32 Purified Clone: 93</td><td>eBioscience Inc.&nbsp;</td><td>14-0161-86</td><td></td></tr><tr><td>APC anti-mouse Ly-6C Clone: HK1.4 Isotype: Rat IgGc</td><td>BioLegend</td><td>128015</td><td></td></tr><tr><td>autoMACS Rinsing Solution</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-222</td><td></td></tr><tr><td>BB515 Rat Anti-CD11b Clone: M1/70</td><td>BD Biosciences</td><td>564455</td><td></td></tr><tr><td>BB700 Rat Anti-Mouse CD4 Clone: RM4-5</td><td>BD Biosciences</td><td>566408</td><td></td></tr><tr><td>BD Microtainer SST</td><td>Becton Dickinson</td><td>365867</td><td>Serum Tube</td></tr><tr><td>BIOTIX&nbsp;Rainin LTS Compatible Racked Filter Tips, p1200</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-111-365</td><td></td></tr><tr><td>BIOTIX&nbsp;Rainin LTS Compatible Racked Filter Tips, p20</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-111-366</td><td></td></tr><tr><td>BIOTIX&nbsp;Rainin LTS Compatible Racked Filter Tips, p200</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-111-362</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Stain Buffer</td><td>BD Biosciences</td><td>563795</td><td></td></tr><tr><td>BUV615 Rat Anti-Mouse Ly-6G Clone: 1A8</td><td>BD Biosciences</td><td>751263</td><td></td></tr><tr><td>BV650 Rat Anti-Mouse I-A/I-E Clone: M5/114.15.2</td><td>BD Biosciences</td><td>563415</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J Neonatal Mice</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>CD45-VioGreen mouse</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-102-412</td><td></td></tr><tr><td>CD64 Antibody, anti-mouse, PE-Vio 770, REAfinity Clone REA286</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-119-659</td><td></td></tr><tr><td>CFX Opus Real-Time PC Systems&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>12011319</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase Type 4</td><td>Worthington Biochemical Corporation&nbsp;</td><td>LS004188</td><td></td></tr><tr><td>DL-dithiothreitol&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>D9779-5g</td><td></td></tr><tr><td>eBioscience FOXP3/Transcription Factor Staining Buffer Set</td><td>Life Technologies Corp.&nbsp;</td><td>00-5523-00</td><td></td></tr><tr><td>EDTA (0.5M), pH 8.0</td><td>Quality Biological Inc</td><td>351-027-721</td><td></td></tr><tr><td>Esbilac Puppy Milk Replacer</td><td>Pet-Ag, Inc.</td><td>99502-1</td><td>Puppy Milk</td></tr><tr><td>Fisherbrand Disposable Cuvettes</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-127</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe (paper/plastic wrap), 10mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11E</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe (paper/plastic wrap), 25mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe (paper/plastic wrap), 50mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11F</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe (paper/plastic wrap), 5mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11D</td><td></td></tr><tr><td>Genie Temp-Shaker 300</td><td>USA Scientific, Inc.</td><td>SI-G1600</td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS Dissociator (protocol; m_intestine-01)</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-093-235</td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS&nbsp; C Tubes</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130096334</td><td></td></tr><tr><td>Ghost Dye Red 780 Viability Dye</td><td>Tonbo Biosciences</td><td>13-0865-T100</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol ReagentPlus</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7757-500ML</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prims Software, Version 10.0</td><td>GraphPad</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Greiner Bio-One Round Bottom Polypropylene Culture Tube with Two-Position Vent Stopper</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-000-212</td><td></td></tr><tr><td>Handi+ Oxygen analyzer</td><td>Maxtec</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Hanks' Balanced Salt Solution</td><td>Gibco</td><td>141650-095</td><td></td></tr><tr><td>HEPES Buffer</td><td>Mediatech, Inc.&nbsp;</td><td>25-060-CI</td><td></td></tr><tr><td>Hypoxia Chamber</td><td>Billups-Rothenburg, Inc.</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Schneider et al., 2012</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Integra Miltex MeisterHand Iris Scissors, 10.2cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-460-655</td><td></td></tr><tr><td>Integra Miltex MeisterHand Iris Scissors, 9cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-460-598</td><td></td></tr><tr><td>Integra Miltex&trade; Swiss Jeweler-Style Forceps</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-460-110</td><td></td></tr><tr><td>Isolette Infant Incubator</td><td>Air-Shields Vickers</td><td>C100-200-2 Series 02</td><td>Incubator for mice</td></tr><tr><td>Kimtech Science Kimwipes Delicate Task Wipes</td><td>Kimberly-Clark</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>LPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L3129-10mg</td><td></td></tr><tr><td>Luria Broth Broth, Miller Molecular Genetics Powder</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1426-500</td><td></td></tr><tr><td>MACS BSA Stock Solution</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-091-376</td><td></td></tr><tr><td>MACSmix Tube Rotator</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-090-753</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuge Tubes</td><td>Thermo Scientific</td><td>3451</td><td>1.5 ml, clear, graduated, sterile</td></tr><tr><td>NanoDrop OneC Microvolume UV-Vis Spectrophotometer</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>ND-ONEC-W</td><td></td></tr><tr><td>Ohaus scout portable balance</td><td>Fisher Scientific</td><td>30253024</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Thermo Scientific</td><td>J

un modello murino neonatale di enterocolite necrotizzante e isolamento della lamina propria per la profilazione delle cellule immunitarie

A Neonatal Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis and Lamina Propria Isolation for Immune Cell Profiling

Un modello murino neonatale di enterocolite necrotizzante e isolamento della lamina propria per la profilazione delle cellule immunitarie

Necrotizing enterocolitis (NEC) is a severe inflammatory disease of the neonatal intestine, primarily affecting preterm infants. NEC is characterized by ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Fonte: Seman, B. G., et al. Un modello di imaging neonatale della sepsi batterica Gram-negativa. J. Vis. Esp. (2020)Il video mostra un modello neonatale di topo per studiare l'infezione sistemica utilizzando batteri bioluminescenti incapsulati. I cuccioli neonatali vengono iniettati con sospensioni batteriche ad alto o basso dosaggio e restituiti alla madre per le cure postnatali. I batteri incapsulati sfuggono alla rilevazione immunitaria precoce, si diffondono sistemicamente e vengono...

Modellazione dell'infezione nei topi neonatali utilizzando batteri bioluminescenti incapsulati

Qui, una procedura è descritta per la creazione di infezione sistemica nel ratto neonatale con colture di Escherichia coli K1. Questa procedura non invasiva consente colonizzazione del tratto gastrointestinale, traslocazione del patogeno alla circolazione sistemica, e l'invasione del sistema nervoso centrale al plesso coroide.

Non invasiva Modello di neuropatogeno Escherichia coli L'infezione neonatale nel ratto

Questo protocollo fornisce i passaggi necessari per stabilire e valutare il sepsis neonatale in 7 giorno-vecchi topi.

Un modello di Mouse controllata per sepsi polimicrobica neonatale

Questo studio dettaglia il processo di quantità precisa di gavaging di probiotici per topi neonatali. Il set-up sperimentale è stato ottimizzato per includere ma non è limitato ai probiotici di dosaggio, metodi di somministrazione e la quantificazione dei batteri nell'intestino.

Studi di probiotici in topi neonatali tramite sonda gastrica

Enteroids stanno emergendo come un modello di romanzo nello studio della malattia umana. Il protocollo descrive come simulare un modello enteroid di enterocolite necrotizzante umano mediante trattamento di lipopolisaccaride (LPS) di enteroids generato dal tessuto neonatale. Enteroids raccolti dimostrano cambiamenti infiammatori simili a quelli osservati nella enterocolite necrotizzante umana.

Un nuovo modello Enteroid epiteliali umane di enterocolite necrotizzantesi

Abbiamo sviluppato un modello di corioamionite per simulare l'esposizione fetale all'infiammazione materna (FEMI) senza complicazioni di organismi vivi per esaminare gli effetti del FEMI sullo sviluppo del tratto intestinale della prole. Ciò consente lo studio delle cause meccaniche per lo sviluppo di lesioni intestinali a seguito della corioamionite.

Un modello murino di esposizione fetale all'infiammazione materna per studiare gli effetti della corioamionite acuta sullo sviluppo intestinale appena nato

L'infezione di topi neonatale con bioluminescente E. coli O1:K1:H7 provoca un'infezione settica con significativa infiammazione polmonare e patologia polmonare. Qui descriviamo le procedure per modellare e studiare ulteriormente la sepsi neonatale utilizzando l'imaging intravitale longitudinale in parallelo con l'enumerazione dei fardelli batterici sistemici, la profilazione infiammatoria e l'istopatologia polmonare.

Un modello di imaging neonatale di sepsi batterica gram-negativa

La funzione di barriera epiteliale intestinale disregolata e le risposte immunitarie sono segni distintivi della malattia infiammatoria intestinale che rimangono scarsamente studiate a causa della mancanza di modelli fisiologici. Qui descriviamo un modello di loop intestinale del topo che impiega un segmento intestinale ben vascolarizzato ed esteriore per studiare la permeabilità della mucosa e il reclutamento di leucociti in vivo.

Valutazione funzionale della permeabilità intestinale e della migrazione transepiteliale neutrofila nei topi utilizzando un modello standardizzato di loop intestinale

L'enterocolite necrotizzante (NEC) è la malattia gastrointestinale (GI) più grave che si verifica spesso nei neonati prematuri, in particolare nei neonati con peso alla nascita molto basso, con alta mortalità e patogenesi poco chiara. La causa del NEC può essere correlata ad anomalie del sistema immunitario infiammatorio. Un modello animale NEC è uno strumento indispensabile per la ricerca immunitaria sulla malattia NEC. I modelli animali NEC di solito usano topi neonatali C57BL / 6J; I topi...

Un modello murino BALB/c neonatale di enterocolite necrotizzante

Questo protocollo descrive un modello in vitro di enterocolite necrotizzante (NEC), che può essere utilizzato per studi meccanicistici sulla patogenesi della malattia. È dotato di un chip microfluidico seminato con enteroidi intestinali derivati dall'intestino neonatale umano, dalle cellule endoteliali e dal microbioma intestinale di un neonato con NEC grave.

Modello microfluidico di enterocolite necrotizzante che incorpora enteroidi intestinali neonatali umani e un microbioma disbiotico

Il parto pretermine (parto &lt; 37 settimane) è un problema urgente di salute globale con opzioni di prevenzione e trattamento non ottimali. Presentiamo un modello murino di parto pretermine indotto da infezione batterica vaginale ascendente e delineiamo come analizzare la morbilità e la mortalità neonatale risultanti.

Modellazione dell'infezione vaginale ascendente, della nascita pretermine e della morbilità neonatale nei topi

Scopri un modello murino neonatale di enterocolite necrotizzante e l'isolamento della lamina propria per la profilazione delle cellule immunitarie mediante citometria a flusso. Questo protocollo supporta la ricerca traslazionale sulle terapie per l'NEC.

Un modello murino neonatale di enterocolite necrotizzante e isolamento della lamina propria per la profilazione delle cellule immunitarie (Video) | JoVE Journal

Un modello murino neonatale di enterocolite necrotizzante e isolamento della lamina propria per la profilazione delle cellule immunitarie

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