Name: Microdissezione da cattura laser del tessuto epatico di topo fissato con paraformaldeide per lanalisi dellRNA (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-17T12:33:00.000+00:00
Duration: 9 min 21 s
Description: Impara la microdissezione laser da cattura del tessuto epatico di topo fissato con PFA per analisi dell'RNA. Questo metodo consente l'isolamento preciso di popolazioni cellulari specifiche con elevata purezza.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Shapiro, E., Biezuner, T., Linnarsson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+sequencing-based+technologies+will+revolutionize+whole-organism+science%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Single-cell sequencing-based technologies will revolutionize whole-organism science.</a> Nat Rev Genet. 14 (9), 618-630 (2013).</li>
<li>Halpern, K. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+spatial+reconstruction+reveals+global+division+of+labour+in+the+mammalian+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Single-cell spatial reconstruction reveals global division of labour in the mammalian liver.</a> Nature. 543 (7647), 352-356 (2017).</li>
<li>Aizarani, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+human+liver+cell+atlas+reveals+heterogeneity+and+epithelial+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A human liver cell atlas reveals heterogeneity and epithelial progenitors.</a> Nature. 572 (7768), 199-204 (2019).</li>
<li>Van Den Brink, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+sequencing+reveals+dissociation-induced+gene+expression+in+tissue+subpopulations%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Single-cell sequencing reveals dissociation-induced gene expression in tissue subpopulations.</a> Nat Methods. 14 (10), 935-936 (2017).</li>
<li>Baron, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+Type+Purification+by+Single-Cell+Transcriptome-Trained+Sorting%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cell Type Purification by Single-Cell Transcriptome-Trained Sorting.</a> Cell. 179 (2), 527-542.e19 (2019).</li>
<li>Gross, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technologies+for+Single-Cell+Isolation%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Technologies for Single-Cell Isolation.</a> Int J Mol Sci. 16 (8), 16897-16919 (2015).</li>
<li>Dries, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+spatial+transcriptomic+data+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Res%22%5BJournal%5D)">Advances in spatial transcriptomic data analysis.</a> Genome Res. 31 (10), 1706-1718 (2021).</li>
<li>Chen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+transcriptomic+atlas+of+mouse+organogenesis+using+DNA+nanoball-patterned+arrays%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal transcriptomic atlas of mouse organogenesis using DNA nanoball-patterned arrays.</a> Cell. 185 (10), 1777-1792.e21 (2022).</li>
<li>Ståhl, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+and+analysis+of+gene+expression+in+tissue+sections+by+spatial+transcriptomics%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Visualization and analysis of gene expression in tissue sections by spatial transcriptomics.</a> Science. 353 (6294), 78-82 (2016).</li>
<li>Espina, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-capture+microdissection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Laser-capture microdissection.</a> Nat Protoc. 1 (2), 586-603 (2006).</li>
<li>Baba, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+profiling+in+biliary+epithelial+cells+of+primary+biliary+cirrhosis+using+laser+capture+microdissection+and+cDNA+microarray%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Gene expression profiling in biliary epithelial cells of primary biliary cirrhosis using laser capture microdissection and cDNA microarray.</a> Transl Res. 148 (3), 103-113 (2006).</li>
<li>Mena, J. E. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+capture+microdissection+after+%CE%B3-glutamyl+transferase+histochemistry%3A+An+optimization+for+gene+expression+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Laser capture microdissection after γ-glutamyl transferase histochemistry: An optimization for gene expression analysis.</a> Anal Biochem. 447, 126-132 (2014).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Next-generation+RNA+Sequencing+of+Archival+Formalin-fixed+Paraffin-embedded+Urothelial+Bladder+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Urol%22%5BJournal%5D)">Next-generation RNA Sequencing of Archival Formalin-fixed Paraffin-embedded Urothelial Bladder Cancer.</a> Eur Urol. 66 (6), 982-986 (2014).</li>
<li>Ludyga, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleic+acids+from+long-term+preserved+FFPE+tissues+are+suitable+for+downstream+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Virchows+Arch%22%5BJournal%5D)">Nucleic acids from long-term preserved FFPE tissues are suitable for downstream analyses.</a> Virchows Arch. 460 (2), 131-140 (2012).</li>
<li>Mägel, L., Bartels, S., Lehmann, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Next-Generation+Sequencing+Analysis+of+Laser-Microdissected+Formalin-Fixed+and+Paraffin-Embedded+%28FFPE%29+Tissue+Specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Next-Generation Sequencing Analysis of Laser-Microdissected Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded (FFPE) Tissue Specimens.</a> Methods Mol Biol. 1723, 111-118 (2018).</li>
<li>Von Ahlfen, S., Missel, A., Bendrat, K., Schlumpberger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determinants+of+RNA+Quality+from+FFPE+Samples%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Determinants of RNA Quality from FFPE Samples.</a> PLoS One. 2 (12), e1261(2007).</li>
<li>Böhm, M., Wieland, I., Schütze, K., Rübben, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbeam+MOMeNT%3A+non-contact+laser+microdissection+of+membrane-mounted+native+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Microbeam MOMeNT: non-contact laser microdissection of membrane-mounted native tissue.</a> Am J Pathol. 151 (1), 63-67 (1997).</li>
<li>Schütze, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cut+out+or+poke+in--the+key+to+the+world+of+single+genes%3A+laser+micromanipulation+as+a+valuable+tool+on+the+look-out+for+the+origin+of+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Genet+Anal%22%5BJournal%5D)">Cut out or poke in--the key to the world of single genes: laser micromanipulation as a valuable tool on the look-out for the origin of disease.</a> Genet Anal. 14 (1), 1-8 (1997).</li>
<li>Datta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+capture+microdissection%3A+Big+data+from+small+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Histol+Histopathol%22%5BJournal%5D)">Laser capture microdissection: Big data from small samples.</a> Histol Histopathol. 30 (11), 1255-1269 (2015).</li>
<li>Desjardins, P., Conklin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NanoDrop+microvolume+quantitation+of+nucleic+acids%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">NanoDrop microvolume quantitation of nucleic acids.</a> J Vis Exp. (45), e2565(2010).</li>
<li>Ge, S. J., Gan, W. Q., Karlinsey, K., Zhou, B. Y., Pachter, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immuno-laser+capture+microdissection+of+perfusion-fixed+mouse+brain+tissue+coupled+to+RNA-seq%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Immuno-laser capture microdissection of perfusion-fixed mouse brain tissue coupled to RNA-seq.</a> J Neurosci Methods. 423, 110548(2025).</li>
<li>Takahashi, K., Beltran, W. A., Sudharsan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+workflow+for+transcriptomic+analysis+from+archival+paraformaldehyde-fixed+retinal+tissues+collected+by+laser+capture+microdissection%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">An optimized workflow for transcriptomic analysis from archival paraformaldehyde-fixed retinal tissues collected by laser capture microdissection.</a> Exp Eye Res. 246, 109989(2024).</li>
<li>Mahalingam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+Capture+Microdissection%3A+Insights+into+Methods+and+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Laser Capture Microdissection: Insights into Methods and Applications.</a> Methods Mol Biol. 1723, 1-17 (2018).</li>
<li>Kim, S. O., Kim, J., Okajima, T., Cho, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+paraformaldehyde-treated+individual+cells+investigated+by+atomic+force+microscopy+and+scanning+ion+conductance+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Converg%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of paraformaldehyde-treated individual cells investigated by atomic force microscopy and scanning ion conductance microscopy.</a> Nano Converg. 4 (1), (2017).</li>
<li>Erickson, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+RT-PCR+gene+expression+analysis+of+laser+microdissected+tissue+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Quantitative RT-PCR gene expression analysis of laser microdissected tissue samples.</a> Nat Protoc. 4 (6), 902-922 (2009).</li>
<li>Pan, D. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+Capture+Microdissection-Based+RNA+Microsequencing+Reveals+Optic+Nerve+Crush-Related+Early+mRNA+Alterations+in+Retinal+Ganglion+Cell+Layer%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Vis+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Laser Capture Microdissection-Based RNA Microsequencing Reveals Optic Nerve Crush-Related Early mRNA Alterations in Retinal Ganglion Cell Layer.</a> Transl Vis Sci Technol. 9 (11), 30(2020).</li>
<li>Civita, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+Capture+Microdissection+and+RNA-Seq+Analysis%3A+High+Sensitivity+Approaches+to+Explain+Histopathological+Heterogeneity+in+Human+Glioblastoma+FFPE+Archived+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Laser Capture Microdissection and RNA-Seq Analysis: High Sensitivity Approaches to Explain Histopathological Heterogeneity in Human Glioblastoma FFPE Archived Tissues.</a> Front Oncol. 9, 482(2019).</li>
<li>Phan, H. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+RNA+sequencing+of+paraformaldehyde-fixed+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">High-throughput RNA sequencing of paraformaldehyde-fixed single cells.</a> Nat Commun. 12 (1), 5636(2021).</li>
<li>Thomsen, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fixed+single-cell+transcriptomic+characterization+of+human+radial+glial+diversity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Fixed single-cell transcriptomic characterization of human radial glial diversity.</a> Nat Methods. 13 (1), 87-93 (2016).</li>
<li>Lin, X. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+analysis+of+RNA+sequencing+methods+with+ribosome+RNA+depletion+for+degraded+and+low-input+total+RNA+from+formalin-fixed+and+paraffin-embedded+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Bmc+Genomics%22%5BJournal%5D)">A comparative analysis of RNA sequencing methods with ribosome RNA depletion for degraded and low-input total RNA from formalin-fixed and paraffin-embedded samples.</a> Bmc Genomics. 20 (1), 831(2019).</li>
<li>Luzzi, V., Mahadevappa, M., Raja, R., Warrington, J. A., Watson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+and+reproducible+gene+expression+profiles+from+laser+capture+microdissection%2C+transcript+amplification%2C+and+high+density+oligonucleotide+microarray+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Diagn%22%5BJournal%5D)">Accurate and reproducible gene expression profiles from laser capture microdissection, transcript amplification, and high density oligonucleotide microarray analysis.</a> J Mol Diagn. 5 (1), 9-14 (2003).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td><forte>Materiale</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubi a parete sottile da 0,2 ml</td><td>Assigeno</td><td>PCR-02-C</td><td>Tubi per la raccolta LCM</td></tr><tr><td>Tubo centrifugo da 1,5 mL</td><td>Assigeno</td><td>339653</td><td></td></tr><tr><td>4% di paraformaldeide</td><td>Leagene</td><td>DF0135</td><td></td></tr><tr><td>Tubo centrifuga da 50 mL</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>339653</td><td></td></tr><tr><td>DEPC (pirocarbonato dietilico)</td><td>Sigma</td><td>D-5758</td><td></td></tr><tr><td>Set digeritivo DNasi I</td><td>Qiagen</td><td>73504</td><td>Componente del kit FFPE RNeasy include la soluzione di base DNase I e il DNase Booster Buffer</td></tr><tr><td>Etanolo (100%)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>BP2818</td><td>Purificato per la biologia molecolare</td></tr><tr><td>Buffer di lavaggio a base di etanolo</td><td>Qiagen</td><td>73504</td><td>RPE buffer (componente del kit FFPE RNeasy)</td></tr><tr><td>Tampone di lavaggio ad alto contenuto di sale</td><td>Qiagen</td><td>73504</td><td>RBC buffer (componente del kit RNeasy FFPE)</td></tr><tr><td>Lame microtome a profilo basso</td><td>Leica Biosystems</td><td>819</td><td></td></tr><tr><td>Mayer' s ematossilina</td><td>Leagene</td><td>DH0001</td><td></td></tr><tr><td>Composto OCT</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Slide rivestito a membrana PEN</td><td>Leica</td><td>11505188</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato</td><td>Leagene</td><td>CC0010</td><td>Priva di DNasi/RNasi</td></tr><tr><td>Poli-L-lisina</td><td>Macklin</td><td>P875131S</td><td></td></tr><tr><td>Buffer digestionale della proteinasi K</td><td>Qiagen</td><td>73504</td><td>PKD buffer (componente del kit RNeasy FFPE)</td></tr><tr><td>Colonna di purificazione</td><td>Qiagen</td><td>73504</td><td>Colonna spin RNeasy MinElute (componente del kit FFPE RNeasy)</td></tr><tr><td>Master mix quantitativo PCR</td><td>Biografia di Takara</td><td>RR820A</td><td>TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)</td></tr><tr><td>Kit di trascrizione inversa</td><td>Qiagen</td><td>205411</td><td>Kit di trascrizione inversa QuantiNova</td></tr><tr><td>Kit di estrazione RNA</td><td>Qiagen</td><td>73504</td><td>RNeasy FFPE Kit</td></tr><tr><td>Kit di sequenziamento dell'RNA (A basso input, catenato)</td><td>Biografia di Takara</td><td>634412</td><td>Kit SMARTer RNA-seq totale catenato - mammifero con input pico v2</td></tr><tr><td>Agente di decontaminazione RNasi</td><td>Solarbio</td><td>SR0040</td><td>Pulizia</td></tr><tr><td>Sucrosio</td><td>Macklin</td><td>S818049</td><td></td></tr><tr><td><forte>Animali e Dieta</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mouse: C57BL/6J</td><td>Centro per gli Animali da Laboratorio della Provincia del Guangdong</td><td>03</td><td></td></tr><tr><td><Dieta > Speciale e Bere acqua</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dieta ricca di grassi e carenza di colina (dieta base)</td><td>TROPHIC Animal Feed High-Tech Co., Ltd.</td><td>TP36310M</td><td>Macronutrienti: proteine, 14 kcal%; carboidrati, 26 kcal%; grasso, 60 kcal%</td></tr><tr><td>Acqua potabile con zucchero</td><td>Macklin</td><td>N/A (preparato internamente)</td><td>Una miscela di D-glucosio (Macklin, Cat# F87500) e D-fruttosio (Macklin, Cat# S818049) è stata aggiunta all'acqua potabile autoclavata a una concentrazione finale di 42 g/L, con un rapporto glucosio/fruttosio di 55:45 (a settimana)</td></tr><tr><td><forte>Primer per topi</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&beta;-actin (Avanti: AGAGGGAATCGTGCGTGAC)</td><td>Sequenziamento BGI</td><td>Personalizzato</td><td>HPLC purificato</td></tr><tr><td>&beta;-actin (Reverso: CAATAGTGATGACCTGGGT)</td><td>Sequenziamento BGI</td><td>Personalizzato</td><td>HPLC purificato</td></tr><tr><td><forte>Equipaggiamento</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microtomo criostatico</td><td>Leica Biosystems</td><td>CM3050 S</td><td></td></tr><tr><td>Sistema bioanalizzatore</td><td>Agilent</td><td>G2939BA</td><td></td></tr><tr><td>Piattaforma di sequenziamento ad alta produttività</td><td>Illumina; Inc.</td><td>Sistema NovaSeq 6000</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di microdissezione a cattura laser</td><td>Leica Microsystems</td><td>Leica LMD6500</td><td></td></tr><tr><td>Sistema PCR quantitativo</td><td>Biosistemi applicati</td><td>Sistema PCR in tempo reale QuantStudio 5</td><td></td></tr><tr><td>Spettrofotometro</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>NP80</td><td>NanoDrop</td></tr><tr><td>Thermal Cycler</td><td>BioRad</td><td>T100</td><td></td></tr><tr><td><forte>Software</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adobe Illustrator CC 2019 (versione 23.0.2)</td><td>Adobe</td><td>https://www.adobe.com/products/illustrator.html</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism (versione 8.3.0)</td><td>GraphPad Software</td><td>https://www.graphpad.com</td><td></td></tr></tbody></table>

microdissezione da cattura laser del tessuto epatico di topo fissato con paraformaldeide per l'analisi dell'rna

Laser Capture Microdissection of Paraformaldehyde-Fixed Mouse Liver Tissue for RNA Analysis

Microdissezione da cattura laser del tessuto epatico di topo fissato con paraformaldeide per l'analisi dell'RNA

Laser capture microdissection (LCM) provides spatial access to specific cell populations within complex tissues through in situ visualization and ...

laser-capture-microdissection-paraformaldehyde-fixed-mouse-liver

Research

JoVE Journal

Biology

Il profilo dell'espressione dell'RNA in regioni cerebrali murine discrete richiede una strategia di raccolta dei tessuti precisa e ripetibile. Viene qui descritto un protocollo che utilizza sia il sezionamento coronale del cervello sia la microdissezione assistita da corer tissutale. Il rendimento e la qualità dell'RNA totale ottenuti dai campioni risultanti confermano l'utilità del metodo delineato.

Non Laser Capture Microscopy approccio per la Microdissezione delle Regioni discreti cervello di topo per la totale isolamento di RNA e valle Next-Generation Sequencing e profili di espressione genica

Analisi dell'espressione genica di un sottogruppo di cellule in un tessuto specifico rappresenta una grande sfida. In questo articolo si descrive come isolare RNA totale di alta qualità da una popolazione di cellule specifiche, combinando un metodo immunomarcatura rapida con microdissezione laser.

RNA isolamento da cellulari sottopopolazioni specifiche utilizzando laser-capture Microdissection combinazione con Rapid immunomarcatura

Qui descriviamo un protocollo semplificato per l'analisi dell'espressione di microRNA (miRNA) in tessuti clinici archiviati Fissati in formalina, inclusi in paraffina (FFPE) o in tessuti clinici freschi congelati per il cancro alla prostata (PCa) che impiegano la PCR quantitativa in tempo reale (RT-PCR) e l'ibridazione in situ (ISH).

Analisi miRNA nel tumore alla prostata tessuti cliniche

L'obiettivo di questo protocollo è utilizzare la micro-dissezione a cattura laser come metodo efficace per isolare popolazioni pure di tipi cellulari da tessuti prostatici eterogenei per l'analisi dell'RNA a valle.

Laser-capture Microdissezione di Human prostatica Epitelio per l&#39;analisi di RNA

Qui, descriviamo un protocollo per una microdissezione laser riproducibile (LCM) per isolare il trabecolato (TM) per analisi di RNA a valle. La capacità di analizzare i cambiamenti nell'espressione genica nella TM vi aiuterà a comprendere i meccanismi molecolari delle malattie oculari correlate a TM.

Microdissezione laser di elevata purezza trabecolato dai Mouse occhi per analisi dell'espressione genica

Vi presentiamo un metodo robusto, conveniente e flessibile per misurare i cambiamenti nel numero di epatociti e nella ploidia nucleare all'interno di campioni di tessuto fisso/crioconservato che non richiede citometria di flusso. Il nostro approccio fornisce una potente firma a livello campione di citologia epatica ideale per monitorare la progressione delle lesioni epatiche e della malattia.

Un metodo ad alto throughput in Situ per la stima della ploidia nucleare epatica nei topi

È stato sviluppato un protocollo di microdissezione di cattura laser (LCM) per ottenere una quantità sufficiente di RNA di alta qualità per l'analisi dell'espressione genica nelle cellule ossee. L'attuale studio si concentra sulle sezioni del femore del topo. Tuttavia, il protocollo LCM riportato qui può essere utilizzato per studiare l'espressione genica nelle cellule di qualsiasi tessuto duro.

Un protocollo di microdissezione di cattura laser che produce RNA di alta qualità da ossa di mouse fresh-congelate

La traduzione della purificazione dell'affinità dei ribosomi (TRAP) consente un isolamento rapido ed efficiente dell'mRNA di traslazione specifico del tipo di cellula. Qui, dimostriamo un metodo che combina l'iniezione idrodinamica della vena della coda in un modello murino di ripopolamento e del trap per esaminare il profilo di espressione degli epatociti ripopolamento.

Profiling dell'espressione genica specifica del tipo di cella nel fegato del mouse

Questo protocollo descrive la microdissezione di cattura laser per l'isolamento della cartilagine e dell'osso da sezioni fresche congelate dell'embrione di topo. La cartilagine e l'osso possono essere rapidamente visualizzate mediante colorazione viola cresilio e raccolte proprio per produrre RNA di alta qualità per l'analisi trascrittomica.

Microdissezione laser di cattura della cartilagine embrionale del topo e dell'osso per l'analisi dell'espressione genica

La microdissezione laser (LMD) è una tecnica sensibile e altamente riproducibile che può essere utilizzata per scoprire percorsi che mediano l'eterogeneità e l'invasione del glioma. Qui, descriviamo un protocollo ottimizzato per isolare le aree discrete dal tessuto glioma utilizzando LMD laser seguito da analisi trascrittomica.

Microdissezione di cattura laser delle sottoregioni del Glioma per la caratterizzazione spaziale e molecolare dell'eterogeneità intratutuale, dell'Oncoflusso e dell'invasione

Presentato qui è un protocollo per la microdissezione laser-cattura (LCM) di tessuti vegetali. LCM è una tecnica microscopica per isolare aree di tessuto in modo privo di contaminazione. La procedura include fissazione del tessuto, incorporamento di paraffina, sessazione, LCM e estrazione dell'RNA. L'RNA viene utilizzato nell'analisi dei trascrimi specifici del tessuto a valle e tempormente risolta.

Microsezione laser-cattura RNA-Sequenziamento per l'analisi dell'espressione genica spaziale e temporale specifica del tessuto nelle piante

Impara la microdissezione laser da cattura del tessuto epatico di topo fissato con PFA per analisi dell'RNA. Questo metodo consente l'isolamento preciso di popolazioni cellulari specifiche con elevata purezza.

Microdissezione da cattura laser del tessuto epatico di topo fissato con paraformaldeide per l'analisi dell'RNA

Esplora altri video