Name: Microscopia di localizzazione a singola molecola delle proteine di membrana utilizzando la marcatura a singolo anticorpo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-20T13:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 51 s
Description: Scopri la microscopia di localizzazione a singola molecola per visualizzare le interazioni anticorpo-epitopo nelle membrane cellulari T. Questo metodo consente di mappare la distribuzione spaziale delle proteine di membrana con risoluzione nanometrica.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>Anticorpo anti-CD81 Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>MA5-44132</td><td>Anticorpi per imaging</td></tr><tr><td>Centrifuga da banco</td><td>Eppendorf</td><td>5424</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina</td><td>MilliporeSigma</td><td>A7906-100G</td><td></td></tr><tr><td>Vetro a coperchio camerato, 8 pozzi</td><td>Cellvis</td><td>C8-1-N</td><td></td></tr><tr><td>Media DMEM</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11960069</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata a fosfato di Dulbecco</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Siero bovino fetale</td><td>MilliporeSigma</td><td>F0926-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldeide, 10 %</td><td>Scienze della microscopia elettronica</td><td>16120</td><td></td></tr><tr><td>Colloidi d'oro, 100 nm</td><td>Ted Pella</td><td>15711 e meno; 20</td><td>Marcatore fiduciario</td></tr><tr><td>Olio per immersione&nbsp;</td><td>Laboratori Cargille</td><td>16245</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio rovesciato&nbsp; equipaggiato con modulo TIRF</td><td>Strumenti Nikon</td><td>Eclipse Ti2-E</td><td>Microscopio</td></tr><tr><td>Linea cellulare Jurkat E6.1</td><td>MilliporeSigma</td><td>88042803-1VL</td><td>Celle di sospensione</td></tr><tr><td>Lancio laser, 6 linee</td><td>Oxxius</td><td>L6CC-CS8-1511</td><td>Laser di eccitazione</td></tr><tr><td>Lipofectamina 2000</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11668019</td><td>Reagente di trasfezione</td></tr><tr><td>Tubo a microcentrifuga, 1,5 mL&nbsp;</td><td>VWR</td><td>89000-028</td><td></td></tr><tr><td>Software per l'imaging microscopico</td><td>Strumenti Nikon</td><td>Ricerca Avanzata NIS-Elements</td><td>Software per l'acquisizione delle immagini</td></tr><tr><td>Objective, 100x/1.49 CFI APO TIRF & nbsp;</td><td>Strumenti Nikon</td><td>MRD01991</td><td>Obiettivo del microscopio</td></tr><tr><td>Paraformaldeide, 16%</td><td>Scienze della microscopia elettronica</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina-Streptomicina</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140-122</td><td>Antibiotici</td></tr><tr><td>Soluzione di poli-L-lisina, 0,01%&nbsp;</td><td>MilliporeSigma</td><td>P4707-50ML</td><td></td></tr><tr><td>Fotocamera Prime 95B sCMOS</td><td>Soluzioni Teledyne Vision</td><td>01-PRIME-95B-R-M-16-C</td><td>Fotocamera</td></tr><tr><td>Supporti RPMI 1640</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11875-093</td><td>Mezzi per celle di sospensione</td></tr><tr><td>Azida di sodio</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>19038-1000</td><td></td></tr><tr><td>Boridriduro di sodio</td><td>MilliporeSigma</td><td>213462-25G</td><td></td></tr><tr><td>Fiaschette di coltura T25</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>169900</td><td></td></tr><tr><td>Microsfere TetraSpeck</td><td></td><td></td><td>Marcatore fiduciario</td></tr><tr><td>Piatto di coltura tissutale, 100 mm&nbsp;</td><td>Corning</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>Linea cellulare U2OS</td><td>ATCC</td><td>HTB-96</td><td>Cellule aderenti</td></tr></tbody></table>

microscopia di localizzazione a singola molecola delle proteine di membrana utilizzando la marcatura a singolo anticorpo

Single-Molecule Localization Microscopy of Membrane Proteins using Single-Antibody Labeling

Microscopia di localizzazione a singola molecola delle proteine di membrana utilizzando la marcatura a singolo anticorpo

The plasma membrane defines the cell shape and serves as the interface that governs intercellular communication. Membrane proteins constitute a major ...

single-molecule-localization-microscopy-membrane-proteins-using

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Dimostriamo l'uso della microscopia di localizzazione per fotoattivazione a fluorescenza (FPALM) per visualizzare simultaneamente più tipi di molecole marcate in fluorescenza all'interno delle cellule. Le tecniche descritte producono la localizzazione di migliaia o centinaia di migliaia di singole proteine marcate con fluorescenza, con una precisione di decine di nanometri all'interno di singole cellule.

Imaging multicolore simultaneo di strutture biologiche con microscopia di localizzazione con fotoattivazione a fluorescenza

Questo protocollo descrive come utilizzare la microscopia a fluorescenza a riflessione interna totale per visualizzare e tracciare singoli recettori sulla superficie delle cellule viventi e quindi analizzare la mobilità laterale del recettore, le dimensioni dei complessi recettoriali e per visualizzare le interazioni transitorie recettore-recettore. Questo protocollo può essere esteso ad altre proteine di membrana.

Ad alta risoluzione Spatiotemporal Analisi del recettore Dynamics per singola molecola di microscopia a fluorescenza

Qui sono mostrati la preparazione di doppi strati lipidici planari supportati da vetro funzionalizzati con proteine, la determinazione della mobilità proteica all'interno e la misurazione delle densità proteiche. Viene delineata una tabella di marcia per la costruzione di un microscopio a riflessione interna totale a rumore ridotto, che consente di visualizzare fluorocromi residenti a doppio strato con un'elevata risoluzione spaziotemporale.

Singola molecola microscopia a fluorescenza su Planar bilayers supportati

Abbiamo dimostrato un metodo per l'immagine di molteplici molecole all'interno di nano-strutture eterogenee alla precisione di una singola molecola utilizzando il legame sequenziale e l'eluzione di anticorpi a fluorescenza.

Molto multiplo, la risoluzione super-risoluzione delle celle T utilizzando la madSTORM

Qui, presentiamo un protocollo per la localizzazione di multi-colore delle proteine di membrana singola in organelli delle cellule vive. Per allegare fluorofori, proteine self-etichettatura sono usate. Proteine, trova in scomparti di diverse membrane dell'organello stesso, possono essere localizzati con una precisione di ~ 18 nm.

Microscopia di multi-colore localizzazione delle proteine di membrana singola in organelli delle cellule di mammiferi dal vivo

Vi presentiamo un protocollo per il rilevamento ottico in tempo reale di singole proteine senza etichetta come essi sono secernuti dalle cellule viventi. Questo si basa su microscopia interferometrica scattering (iSCAT), che può essere applicata ad una varietà di diversi sistemi biologici e configurazioni.

Label-Free Imaging di singole proteine secernuto dalle cellule viventi tramite iSCAT microscopia

Qui, presentiamo un protocollo per valutare l'omogeneità d'etichettatura per ogni specie di proteine in un campione di proteina complessa a livello di singola molecola.

Quantificazione di tutto il proteoma di etichettatura omogeneità a livello di singola molecola

La microscopia di localizzazione 3D a molecola singola viene utilizzata per sondare le posizioni spaziali e le traiettorie di movimento delle proteine fluorescenti etichettate nelle cellule batteriche viventi. Il protocollo sperimentale e di analisi dei dati descritto nel presente documento determina i comportamenti diffusivi prevalenti delle proteine citosoliche basate su traiettorie a singola molecola raggruppate.

Microscopia di tracciamento a singola molecola - Uno strumento per determinare gli stati diffusivi delle molecole citosoliche

Questo protocollo descrive un approccio basato sull'elaborazione delle immagini e sul tracciamento di singole particelle basato su iSCAT che consente l'indagine simultanea della massa molecolare e del comportamento diffusivo delle macromolecole che interagiscono con le membrane lipidiche. Le istruzioni dettagliate per la preparazione del campione, la conversione da massa a contrasto, l'acquisizione di filmati e la post-elaborazione sono fornite insieme alle indicazioni per prevenire potenziali...

Tracciamento delle particelle sensibili alla massa per caratterizzare la dinamica delle macromolecole associate alla membrana

Qui viene presentato un protocollo per eseguire e analizzare il legame, la mobilità e l'assemblaggio di singole molecole su membrane lipidiche affollate artificiali utilizzando la microscopia a fluorescenza a riflessione interna totale a singola molecola (smTIRF).

Diffusione e assemblaggio di singole molecole su membrane lipidiche affollate di polimeri

Questo articolo fornisce una descrizione dettagliata di come creare campioni per il tracciamento a singola proteina in bistrati lipidici supportati da solidi. Spiega anche un microscopio a fluorescenza semplice con sensibilità a singola molecola e un frame rate elevato. Infine, delineiamo la procedura per estrarre traiettorie a singola proteina.

Tracciamento di singole proteine nei bilayer lipidici tramite microscopia a fluorescenza

Scopri la microscopia di localizzazione a singola molecola per visualizzare le interazioni anticorpo-epitopo nelle membrane cellulari T. Questo metodo consente di mappare la distribuzione spaziale delle proteine di membrana con risoluzione nanometrica.

Microscopia di localizzazione a singola molecola delle proteine di membrana utilizzando la marcatura a singolo anticorpo

Esplora altri video