透過型電子顕微鏡を用いたシアノバクテリア細胞外小胞の可視化

ポリビニルフォーマル樹脂でコーティングされた透過型電子顕微鏡またはTEMグリッドを、きれいなプラスチックフィルムの上に置きます。

濃縮および精製された細胞外小胞またはEV、ナノサイズの膜結合粒子の懸濁液をグリッド上に追加します。

これらのEVはシアノバクテリアによって分泌され、膜内に高分子を運びます。

グリッドをインキュベートして、EVが樹脂でコーティングされた表面に吸着できるようにします。

清潔な濾紙でグリッドの端に触れて、余分な懸濁液を吸収します。

酢酸ウラニルにグリッドを浮かべて、付着した小胞を染色します。

酢酸ウラニルが小胞を取り囲み、イメージング中のコントラストを高める暗い輪郭を作り出します。

グリッドを取り外し、濾紙を使用して余分な汚れを吸収します。

グリッドを超純水で洗い、残留汚れを取り除きます。洗濯を繰り返してから自然乾燥させます。

最後に、TEMを使用してEVを視覚化し、その形態、サイズ、純度を評価します。

5マイクロリットルの小胞を慎重に塗布し、5分間放置します。グリッドの端を清潔なろ紙に接触させてサンプルを取り除きます。

20〜50マイクロリットルの2%酢酸ウラニルをプラスチックフィルムで覆われた平らな面にピペットで取り出します。次に、グリッドをその上に浮かべて2分間置きます。ろ紙を使用して酢酸ウラニルを取り除き、超純水を一滴垂らして洗浄します。