カプセル形成病原性細菌株の培養と単離

別々の寒天プレートで培養した病原性細菌株から始めます。

各株は、保護多糖類層であるカプセルの生成に関与する遺伝子に異なる変異を持っています。

プレートから栄養豊富な液体培地を含む別々のチューブに単一のコロニーを移し、インキュベートします。

インキュベーション中、細菌は指数関数的な成長段階に入り、カプセル産生遺伝子を発現します。

これらの遺伝子の変異はカプセル産生にばらつきをもたらし、カプセル化されていない、弱くカプセル化された、および重度にカプセル化された細胞を生成します。

培養物を移し、遠心分離して細胞をペレット化します。

カ

プセル化されていない細胞と弱カプセル化された細胞は高密度のペレットを形成しますが、重くカプセル化されたセルは、

水和カプセル層により、密度の低いペレットを形成します。

重くカプセル化された細胞を失わないように、上清を慎重に除去します。

バッファーを加え、再度遠心分離し、上清を廃棄して残留培地を除去します。

細胞を緩衝液に再懸濁して、さらなる増殖を促進することなく細菌を安定させ、それによってカプセル構造を維持します。

滅菌ループを備えたストックプレートから単一のコロニーを選択し、10ミリリットルの適切なブロスを接種します。

培養物を一晩インキュベートします。次に、培養物を15ミリリットルのチューブに移し、遠心分離します。次に、上清を廃棄し、ペレットを2ミリリットルのPBSに再懸濁します。

遠心分離を繰り返し、得られた上清を廃棄します。次に、ペレットを2ミリリットルのPBSに再懸濁します。