不連続密度勾配を用いたカプセル量による細菌の分離

ポリビニルピロリドンでコーティングされた無毒のコロイドシリカ粒子を使用して調製された、事前に設定された不連続密度勾配を含むチューブから始めます。

勾配は、上から下に密度が増加する順に配置された3つの重ならない層で構成されます。

ランダムなトランスポゾン誘発変異を持つ細菌株のプールされた懸濁液である細菌トランスポゾン変異体ライブラリーを取ります。

これらの変異のサブセットは、細菌の細胞壁を取り巻く多糖類層であるカプセルを調節する遺伝子を破壊し、その結果、カプセル量が変化する株が生成されます。

界面を混合せずに、細菌ライブラリをグラジエントの上部に非常にゆっくりと追加します。

チューブを適度な速度で遠心分離します。

勾

配は、カプセル量に基づいて細菌の異なる移動

を促進します。

ハイパーカプセル化株は、水和多糖類層のために密度が低く、上部近くに局在します。

弱くカプセル化された株は中央に沈殿し、カプセル化されていない密度の高い株は底に移動します。

分離

された細菌株は、下流の分析の準備が整います。

準備した細胞600マイクロリットルをチューブ内のグラジエントの上部に注意深く加えます。次に、チューブをチューブアダプターに入れ、アダプターでチューブの重量を量ってバランスを確保します。この後、チューブアダプターをベンチトップ遠心分離機内の固定角度ローターに入れ、チューブを3, 000 gで30分間遠心分離します。

最後に、遠心分離後、チューブを慎重に取り外し、ラックに置き、結果を写真に撮ります。