ヒトノロウイルスの細菌由来組換えPドメインタンパク質の精製

多孔質球状ゲルビーズを充填したサイズ排除クロマトグラフィーカラムを取ります。

分離中にタンパク質の構造的完全性を維持するバッファーでカラムを平衡化します。

組換え発現ヒトノロウイルスPドメインタンパク質と残留タンパク質不純物を含む精製細菌抽出物をロードします。

バッファーを加えて、サンプルをカラムに通します。

大きな残留不純物は細孔に入らず、ビーズ間の空間を通過できず、最初に溶出します。

UV吸光度を使用して溶出を監視します。小さなピークは、不純物がカラムから出ていることを示します。

対照的に、小さなPドメインタンパク質はビーズ細孔に入り、より長い経路を移動し、後で溶出します。吸光度ピークの上昇は、Pドメインタンパク質の溶出を示します。

Pドメインタンパク質を含む溶出画分を収集し、さらなる分析の準備が整いました。

高速液体クロマトグラフィー精製システムのポンプとパイプを洗浄し、サイズ排除クロマトグラフィーカラムをゲルろ過バッファーで予備平衡化します。濃縮サンプルの量に応じて、スーパーループまたはループを使用して、毎分 1 ミリリットルの流速で P ドメインをカラムに注入します。注入が終了したら、流量を毎分2.5ミリリットルに増やします。

光学密度が増加し、Pドメインがカラムから外れると、1.5ミリリットルのフラクションを収集します。Pドメインは通常、二量体として溶出されます。