型別不可能なインフルエンザ菌の培養

ヒト気道病原体である型別不可能なイン フルエンザ菌 株から始めます。

細菌培養物を栄養豊富な選択培地にストリークし、CO₂が豊富な条件下でインキュベートして気道環境を模倣します。

インキュベーション中、細菌は栄養素を利用して増殖し、コロニーを形成します。

コロニーを選択的液体培地に移し、インキュベートして液体培養における細菌の増殖を促進します。

アリコートを微量遠心チューブに移します。

遠心分離して細菌を分離し、上清を廃棄します。

細菌を緩衝液に再懸濁し、再度遠心分離して細菌を洗浄および分離し、残留培地を含む上清を廃棄します。

バクテリアをバッファーに再懸濁し、希釈します。

分光光度計を使用して、600 nmで光学密度を測定し、細菌濃度を推定します。

希釈した細菌培養物を選択培地にプレートし、インキュベートしてコロニーを形成します。

コロニーを数えて、将来の使用のために接種物を準備するためのコロニー形成単位を計算します。

NTHIをチョコレート寒天プレートにプレートします。プレートを摂氏37度で5%の二酸化炭素で一晩逆さまにインキュベートします。翌日、脳心臓注入ブロスで細菌を培養します。

次に、微量遠心チューブに1ミリリットルのブロスを加えます。ミックスを室温で4,000gで5分間回転させます。次に、上清を廃棄し、ペレットを1ミリリットルのPBSに再懸濁します。この洗浄手順をもう一度繰り返します。

次に、100マイクロリットルの再懸濁溶液を900マイクロリットルのPBSで希釈し、600ナノメートルで培養物の吸光度を測定します。この情報を使用して、接種量をミリリットルあたり2,000万CFUに調整します。

次に、接種物の生存率とCFUを決定します。チョコレート寒天プレート上でブロスの1〜10回の連続希釈液を培養し、プレートを一晩インキュベートします。