注射器を用いた圧力法による細胞外細菌の抽出

細菌を事前に接種した シロイナズナの 葉を取って、植物と微生物の相互作用を調べます。

これらの細菌はアポプラスト(細胞間空間)で増殖し、マイクロコロニーを形成します。

葉の根性が確立したら、葉を切り取り、針なし注射器に入れます。

蒸留水を加えて組織を覆います。

プランジャーを挿入し、注射器を立ててタップし、プランジャーを調整して閉じ込められた空気を解放します。

先端をパラフィルムで密封し、アポプラスト抽出用の密閉チャンバーを作ります。

プランジャーを押して組織が暗くなるまで正圧をかけ、圧縮と水分が細胞間空間に侵入して細菌を押し出します。

次に、プランジャーを引いて組織マトリックスを膨張させ、液体や細菌を引き出して負圧をかけます。

圧力サイクルを繰り返してせん断力を発生させ、マイクロコロニーを破壊し、植物組織を傷つけずに細菌を放出します。

注射器の封を開け、分散した細菌を含む細胞膜液を採取してさらなる分析を行います。

接種から4日後、 シロイナナ の空中部分か豆の葉を切り取り、針を使わずに20ミリリットルの注射器に入れます。

豆の葉の場合は、葉を自身に巻きつけて、背側の面を外側に出します。組織全体を覆うほど蒸留水を足します。次に、注射器を立てた位置にプランジャーを挿入し、バレルを軽く叩いて空気が先端近くに集まるまでポンプで取り除き、空気を取り除いた後、注射器の先端にパラフィンフィルムを貼ります。

次に、プランジャーを慎重に押して正圧を作り、組織が濃くなるまで続けます。次にプランジャーを引いて負圧を発生させます。パラフィンフィルムとプランジャーを取り外し、アポプラストから抽出された細菌を含む液体を集めます。