マイコバクテリウム・ブスペサスに感染したゼブラフィッシュ胚における宿主-病原体相互作用のライブ画像化

まず、麻酔下で透明なトランスジェニックゼブラフィッシュ胚から始め、蛍光標識されたマクロファージを発現させます。

胚は蛍光標識された Mycobacterium abscessus 粗い株を尾部筋肉に事前に注射し、局所感染を誘発します。

これらの細菌に表面グリコペプチドリピドが存在しないことが、それらの凝集を促進します。

胚を低融点のアガロースに固定し、感染部位を露出させる位置を整えます。

アガロースが固まったら、麻酔を維持し脱水を防ぐために麻酔剤を含む魚の水を加えます。

蛍光顕微鏡で感染をリアルタイムで監視します。

感染後、内因性マクロファージは細菌に向かって移動し、個々の細胞を貪食します。

しかし、一部の細菌はコード(細長い細胞外集合体)を形成し、複製・拡散し、食細胞作用に抵抗し、宿主細胞の死と免疫浸潤を引き起こします。

それにもかかわらず、免疫細胞は索を除去できず、細菌や死んだ宿主細胞が蓄積して膿瘍を形成します。

これによりコードが キーMであることが明らかになります。 膿瘍 免疫回避戦略。

M. abscessus感染のライブ画像診断では、1%の低融点アガロースに、倒立顕微鏡用に35ミリガラス底ペトリ皿、または直立共焦点顕微鏡用に単一の空洞凹部スライドで麻酔した胚を照射します。胚を所定の位置に向き合わせ、固まったアガロースをトリカインを含む魚の水で覆います。最後に、10倍対物レンズの蛍光顕微鏡または40倍または63倍の蛍光共焦点顕微鏡を用いて、胚の逐次蛍光取得および透過イメージングを行います。