ゼブラフィッシュモデルを用いたマイコバクテリア感染における宿主免疫の役割の評価

リンパ球を欠く麻酔された野生型ゼブラフィッシュや免疫不全のゼブラフィッシュを例に挙げましょう。

魚を腹部を上にして、湿ったスポンジで彫ったスリットに入れて生存性を保ちます。

マイ コバクテリウム・マリナム を腹部に注射し、ヒト結核をモデル化した全身感染を確立します。

注入後は魚を淡水槽の水に移して回復させ、観察してください。

野生型魚では、炎症反応により細菌、感染したマクロファージ、リンパ球からなる肉芽腫が形成されます。肉芽腫には細菌が含まれており、その広がりを防ぎます。

リンパ球はマクロファージの抗菌機能を強化するサイトカインを分泌し、細菌の殺菌を可能にします。

免疫抑制状態の魚では、肉芽腫にリンパ球が欠けています。その結果、マクロファージは部分的に活性化されたまま、細菌は生き残り、増殖し、拡散できるため、魚の死に至ります。

生存グラフを生成してください。免疫抑制状態の魚類における高い死亡率は、リンパ球が感染制御に果たす役割を強調しています。

まず、希釈した細菌溶液の5マイクロリットルの液滴をパラフィンフィルムにピペットで送ります。その後、その滴を30ゲージのインスリン針に引き込みます。

この実験には5〜8ヶ月の魚を使い、1匹は野生型、もう1匹はラグミュータントフィッシュです。これらの魚を、湿った発泡プラスチックのスリットの中に腹側を上に位置させます。インスリン針を骨盤フィンの間に45度の角度で注射します。

針の開口部を上に保ち、開口部全体が腹腔内に収まるようにしてください。その後、ゆっくりと細菌溶液を注入します。その後、針を慎重に外し、すぐに新鮮な水槽の水が満たされた回収水槽に移します。

使用中の細菌アリコートから15分ごとに7H10のプレートにサンプルを採取してください。これらのサンプルは29度の摂氏で5日間潜伏し、感染量を検証します。魚の健康状態を定期的に確認し、感染症状のある魚は3-アミノベンゾア酸エチルエステルを0.02%以上の水中で抱卵して安楽死させることを必ずしてください。