ウイルス抗原特異的T細胞を用いたB型肝炎ウイルスの複製抑制

B型肝炎ウイルス(HBV)の抗原に結合する受容体を持つT細胞を取ります。

T細胞をマウスの尾静脈に注入します。

注入された細胞を肝臓に広がらせます。

ウイルス感染を模倣するには、HBVゲノムを運ぶプラスミドを採取します。

プラスミドを尾静脈に急速に注入し、プラスミドを肝臓に導きます。

液体の力は血管内皮を透過させ、細胞内に一時的な細孔を生成します。

プラスミドは細胞に入り、RNA合成を受け、ウイルスタンパク質の生産に使用されるmRNAを生成します。

これらのタンパク質のいくつかはウイルス抗原として作用します。

抗原提示分子はウイルス抗原を細胞表面に運び、T細胞にさらします。

これらの免疫細胞はウイルス抗原と相互作用し、感染した細胞を排除するメカニズムを開始し、ウイルスタンパク質の集合と拡散を阻

害します。

尾静脈を介した流体力学的HPVプラスミド送達のために、10マイクログラムのHPVプラスミドをPBSの体重の8%相当で希釈します。プラスミドを、マウスごとに26ゲージのハーフインチ針を備えた1つの3ミリリットル注射器にロードします。

HHDマウスをヒートランプの下で5分間加熱して尾静脈を拡張し、マウスをプラスチック製の拘束器に慎重に引き込みます。尾の中央の3分の1に拡張した外側尾静脈を見つけ、静脈に平行に針を挿入して、3〜5秒の期間にわたって尾静脈を通してプラスミドの全量を送達します。

ウイルス抗原特異的iPS細胞由来のCD8陽性T細胞養子細胞移植の場合、実証されているように、培養22日目にiPSC CD8陽性T細胞を収集し、細胞を新しい10センチメートルの細胞培養皿に播種します。

細胞培養インキュベーターで30分間後、浮遊細胞を70マイクロメートルのナイロンストレーナーでろ過し、生細胞をカウントします。希釈すると、PBS 濃度の 1 ミリリットルあたり^1.5 x 10 7 細胞になります。

先ほど実証したように、200マイクロリットルの細胞を生後4〜6週間の個々のHHDマウスに尾静脈に注入します。細胞移植後14日目に、示されているように流体力学的HPVプラスミド送達を実行します。