一過性DMSO治療による幹細胞分化の促進

多系統分化能力を持つ付着したヒト多能性幹細胞を含むマルチウェルプレートから始めます。

ジメチルスルホキシドまたはDMSOを含む幹細胞培地を導入します。

DMSOは細胞に入り、細胞周期の初期段階であるギャップ1期(G1期)から合成期(S期)への細胞周期の進行を防ぎます。

これにより、G1 期に均一な細胞集団が作成され、分化能力が高まります。

培地を、BMPおよびTGF-βシグナル伝達経路の阻害剤を含む栄養豊富な外胚葉分化培地に置き換えます。

これらの阻害剤は幹細胞上の特定のALK受容体に結合し、BMPおよびTGF-βシグナル伝達経路を遮断し、内胚葉および中胚葉前駆体への分化を防ぎます。

これにより、G1停止幹細胞を神経分化能力を持つ外胚葉前駆体に選択的に分化させることができます。

栄養素と分化因子のレベルを維持し、細胞の生存を確保するために、培地を定期的に新しい培地と交換してください。

2D培養で説明されているように、細胞をDMSOで前処理し、NogginおよびSP431542ストック溶液を調製します。3〜4日間の培地交換に十分な10%ノックアウト血清置換またはKOSRをノックアウトDMEMで調製します。原稿に記載されているように、予熱したKOSRノックアウトDMEMにNogginとSP431542を添加することにより、外胚葉分化培地を調製します。

DMSO前処理後、細胞から培地を吸引し、各ウェルに2ミリリットルの分化培地を加えます。細胞を二酸化炭素インキュベーターで摂氏37度で3〜4日間インキュベートし、培地を毎日新鮮な分化因子に交換します。