電位感受性色素で染色された脳切片における神経活動の光学的記録

神経膜に統合し、膜電位の変化に応答する蛍光分子である電位感受性色素またはVSDで染色された固定化されたマウスの脳スライスを取ります。

スライスを記録チャンバーに入れます。

ベースライン電圧基準用の接地電極を取り付けます。

次に、刺激電極と記録電極をスライス上に配置します。

電気パルスを印加します。

パルスはニューロンを刺激し、電位依存性ナトリウムチャネルの開放とナトリウムイオンの流入を引き起こし、膜電位変化を引き起こします。

これにより、記録電極によって測定される活動電位が誘導され、VSDの蛍光特性が変化します。

脳スライスを特定の波長にさらしてVSDを励起し、蛍光発光をトリガーします。

刺激後、ナトリウムチャネルが閉じ、電位依存性カリウムチャネルが開き、カリウムイオンの流出が促進されます。

これにより膜電位が再び変化し、その結果、VSDの蛍光が変化します。

蛍光をリアルタイムで記録し、ニューロンの活動を視覚的に表現します。

この手順を開始するには、アンプ、コンピューター、およびカメラシステムの電源を入れ、ソフトウェアを開きます。aCSFを50ミリリットルのチューブに注ぎ、カルボゲンで泡立てます。蠕動ポンプを使用して aCSF を循環させ、流量を毎分約 1 ミリリットルに調整します。

次に、実験室内の液面が常に一定になるように吸引ピペットの高さを調整します。接地電極をチャンバーに入れます。続いて、ガラス電極に少量のaCSFを充填し、電極ホルダーに入れます。ホルダーをマニピュレーターのロッドに取り付けます。

アンプを使用して、電極抵抗が約 1 メガオームであることを確認します。記録セッションでは、湿ったチャンバーから実験チャンバーにスライスを移します。リングの端をシリコンOリングにしっかりと押し込みます。膜や実験室の底を壊さないように注意してください。

顕微鏡下で、刺激電極の先端と電界電位記録電極をスライスの上に置きます。刺激を与えることで誘発された反応をチェックします。光記録システムの右神経回路を視野がカバー

していることを確認します。

次に、励起光の強度をカメラの最大容量の約70%から80%に調整します。蛍光灯を使用して、取得システムで焦点を調整します。次に、記録を開始し、取得後に画像取得ソフトウェアでデータを解析します。