Golgi-Cox金属染色法によるマウス脳切片におけるニューロンの顕微鏡イメージング

ニューロンを選択的に暗くするためにゴルジコックス溶液で染色し、脳領域を強調するためにクレシルバイオレットで対比染色した厚い脳切片から始めます。

組織の透明性を高めるために透明剤で前処理されたスライドにそれらを置きます。

スライドを顕微鏡ステージに置き、シリコーンオイルを塗布し、対物レンズがオイルに接触するまで下げます。

シリコーンオイルは対物レンズとスライドの屈折率に一致し、詳細なイメージングを可能にします。

サンプルに焦点を合わせ、カメラの露出とホワイトバランスを調整して、最適な画質を実現します。

上のレイヤーにフォーカスして上限を設定し、次に下のレイヤーにフォーカスして下限を設定します。

ニューロンの投影の詳細をキャプチャするために、画像間の間隔を十分なオーバーラップで調整します。

さまざまな場所でイメージングを繰り返して関心のある領域をキャプチャし、これらの画像をオーバーレイしてニューロンの 3 次元表現を作成します。

目的のニューロンを含む領域の高解像度画像スタックをキャプチャするには、まず顕微鏡で30x 1.05 NAシリコーンオイル浸漬対物レンズを選択します。次に、スライドに3〜4滴のシリコン浸漬オイルを塗布します。対物レンズをスライドの上に置き、対物レンズとオイルが接触するようにします。画像に焦点を合わせ、イメージングソフトウェアで露出やホワイトバランスなどのカメラ設定を調整します。次に、セクションの上部にフォーカスし、画像取得ウィンドウ内でスタックの先頭の横にある [設定] を選択して、画像スタックの上限と下限を設定します。

次に、セクションの一番下にフォーカスし、スタックの一番下にある [設定] を選択します。画像取得ウィンドウ内の画像間の距離の横に1ミクロンを入力して、ステップ距離を1ミクロンに設定します。最後に、画像取得ウィンドウ内で [画像スタックの取得] を選択して、画像スタックをキャプチャします。前の手順を繰り返して対象領域全体をキャプチャし、すべての画像スタックが x 軸と y 軸で少なくとも 10% 重な

っていることを確認します。