石英マイクロニードルを使用したげっ歯類脳マイクロインジェクション

カスタマイズされた穴のある石英マイクロニードルを、水で満たされた注射器に取り付け、マイクロポンプに接続して送達速度を制御します。

注射部位が露出した安全な麻酔ラットを取ります。

マイクロニードルを配置し、その下にパラフィンフィルムを置きます。その上に注射液を一滴垂らします。

水を引っ込めて気泡を作り、マイクロニードルを下げて溶液を引き出します。

液滴を形成し、確実に通過できるようにします。

鋭利な針を使用して脳の膜に穴を開

けます。組織

片が針に浸透しないように、低速でセットしたままマイクロニードルを挿入します。

位置が整ったら、少し深く入ります。逆流を避けるために、配信を停止し、再度上げてください。

高速

で配信を開始します。針の穴により、注入された溶液が最適に分布します。

拡

散を促進するために、針を引き抜く前に十分な時間を取ってください。

プラスチックパラフィンフィルムの小片を切り取り、頭蓋骨の上に置きます。10マイクロリットルのピペットを使用して、プラスチックパラフィンフィルムに塗布する溶液を一滴垂らします。ポンプを停止します。ポンプのプッシャーを少し回収し、マイクロインジェクションシリンジのピストンをそっと引っ張って毛細管内に小さな気泡を作ります。

針の先端がドロップに達するまで下げます。マイクロインジェクションシリンジのピストンを非常にゆっくりと引っ張ってサンプルを抽出し、気泡の形成を避けます。ピストンに接触しているポンププッシャーを交換し、毎分0.3マイクロリットルの流量でポンプをオン

にします。

次に、次のステップに進む前に、ドロップが形成されるまで待ちます。その後、流量を毎分0.1マイクロリットルに下げます。ステンレス鋼の斜角針で硬膜に傷をつけ、針をゆっくりと下げて脳組織に入ります。希望の位置に達したら、さらに0.1ミリメートル下がってから、ポンプを停止します。

立体アームを0.1ミリメートル上げ、毎分0.3マイクロリットルでポンプを再び始動します。その後、タイマーと注入を開始します。注入中の気泡の動きを監視します。最後に、ポンプを停止し、5分間待ってからゆっくりと針を取り出します。