Name: 哺乳類の遺伝子発現を制御するための光誘導システムの迅速な最適化 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-04T14:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: 学ぶ光遺伝学ツールLACEを用いた哺乳類細胞の遺伝子発現制御法。3DプリントLEDアレイとHEK293T細胞培養を組み合わせ、ハイスループットで最適化する手法を解説。

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<table><tbody><tr><td>1.5 mLマイクロ遠心分離機チューブ</td><td>VWR</td><td>10025-724</td><td></td></tr><tr><td>10 mL試薬貯蔵庫</td><td>VWR</td><td>77395-252</td><td></td></tr><tr><td>10 mL 血清学ピペット</td><td>VWR</td><td>75816-100</td><td></td></tr><tr><td>1000 & mu;Lフィルターの先端</td><td>VWR</td><td>76322-154</td><td></td></tr><tr><td>15 mL &nbsp;高性能遠心分離機チューブ、フラットキャップ</td><td>VWR</td><td>89039-664</td><td></td></tr><tr><td>1931-C光パワーメーター</td><td>ニューポート</td><td>1931-C</td><td></td></tr><tr><td>2 mL 血清学ピペット</td><td>VWR</td><td>75816-104</td><td></td></tr><tr><td>20 & mu;Lフィルターの先端</td><td>VWR</td><td>76322-134</td><td></td></tr><tr><td>200 & mu;Lフィルターの先端</td><td>VWR</td><td>76322-150</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 高性能遠心分離機チューブ、フラットキャップ</td><td>VWR</td><td>89039-656</td><td></td></tr><tr><td>96ウェルVボトムプレート</td><td>ブランドプレート</td><td>781661</td><td></td></tr><tr><td>A21、LED赤い電球</td><td>ブルーックス電球</td><td>該当なし</td><td>赤色光源</td></tr><tr><td>Arduino IDEソフトウェア</td><td>Arduino</td><td>該当なし</td><td></td></tr><tr><td>バイオセーフティキャビネット、クラスII</td><td>ヌアイレ</td><td>該当なし</td><td></td></tr><tr><td>ブライトライン血球計</td><td>ハウサー・サイエンティフィック</td><td>3110</td><td></td></tr><tr><td>細胞計数スライド</td><td>バイオラッド</td><td>1450016</td><td></td></tr><tr><td>細胞培養プレート 96ウェル、#1.5H ガラス底板</td><td>セルヴィス</td><td>P96-1.5H-N</td><td></td></tr><tr><td>CytExpertソフトウェア</td><td>ベックマン・カウルター</td><td>該当なし</td><td></td></tr><tr><td>CytoFLEX レディトゥユース デイリーQC蛍光球</td><td>ベックマン・カウルター</td><td>C65719</td><td>4 & deg;C</td></tr><tr><td>CytoFLEX-S フローサイトメーター(バイオレット4、ブルー2、イエローグリーン4、レッド3チャンネル)</td><td>ベックマン・カウルター</td><td>C09766</td><td></td></tr><tr><td>ダルベッコのリン酸塩緩衝生理食塩水粉末、カリカムもマグネシウムもなし</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>21600069</td><td>室温</td></tr><tr><td>エッペンドルフ遠心分離機5804</td><td>エッペンドルフ</td><td>&nbsp;022622501</td><td>V字底板遠心分離機ステップ</td></tr><tr><td>エッペンドルフ遠心分離機 5810R</td><td>エッペンドルフ</td><td>22625501</td><td></td></tr><tr><td>エッペンドルフ・リサーチプラス、8チャンネル、可変音量、30 - 300 & mu;L</td><td>エッペンドルフ</td><td>3125000052</td><td></td></tr><tr><td>エッペンドルフ・リサーチプラス、シングルチャンネル、可変音量、100 - 1000 & mu;L</td><td>エッペンドルフ</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>エッペンドルフ・リサーチプラス、シングルチャンネル、可変ボリューム、2 - 20 & mu;L</td><td>エッペンドルフ</td><td>3123000039</td><td></td></tr><tr><td>エッペンドルフ・リサーチプラス、シングルチャンネル、可変ボリューム、20 - 200 & mu;L</td><td>エッペンドルフ</td><td>3123000055</td><td></td></tr><tr><td>汎用ラボラベリングテープ</td><td>VWR</td><td>89097-920</td><td></td></tr><tr><td>Gibco DMEM、粉末、高グルコース</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>12100061</td><td>4 & deg;C</td></tr><tr><td>Gibco Trypan Blue Solution、0.4%</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>15-250-061</td><td>室温</td></tr><tr><td>Gibco Value Heat Inactivated FBS</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>A5256901</td><td>-20 & deg;C</td></tr><tr><td>Gibco、トリプシン-EDTA(0.05%)、動物由来のEDTA、1X、フェノールレッド、500mL</td><td>ギブコ</td><td>25300062</td><td>-20 & deg;C</td></tr><tr><td>HEK293T 細胞</td><td>ATCC</td><td>CRL-11268</td><td>-80 & deg;C、液体窒素</td></tr><tr><td>ラボマーカー、ミクロノヴァ</td><td>VWR</td><td>89205-944</td><td></td></tr><tr><td>金属製デスクランプ</td><td>シンプルなデザイン</td><td>該当なし</td><td>赤い光用のランプ</td></tr><tr><td>オプトプレート-96</td><td>LABメーカー</td><td>該当なし</td><td></td></tr><tr><td>ピペットエイドXP</td><td>ドラモンド</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>プラスミド:CIBN-gRNA</td><td>該当なし</td><td>該当なし</td><td>-20 & deg;C</td></tr><tr><td>プラスミド:CMV-eGFP</td><td>該当なし</td><td>該当なし</td><td>-20 & deg;C</td></tr><tr><td>プラスミド:CRY2-eGFP</td><td>該当なし</td><td>該当なし</td><td>-20 & deg;C</td></tr><tr><td>PolyJet DNA in vitro トランスフェクション試薬</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>NC1536117</td><td>4 & deg;C</td></tr><tr><td>T-75細胞培養フラスコ</td><td>VWR</td><td>10062-860</td><td></td></tr><tr><td>ウォータージャケット式CO2インキュベーター</td><td>VWR</td><td>10810-884</td><td></td></tr></tbody></table>

哺乳類の遺伝子発現を制御するための光誘導システムの迅速な最適化

Rapid Optimization of a Light-Inducible System to Control Mammalian Gene Expression

Inducible gene expression tools can open novel applications in human health and biotechnology, but current options are often expensive, difficult to ...

rapid-optimization-light-inducible-system-to-control-mammalian-gene

Research

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Bioengineering

このビデオは、マウスモデルにおけるテトラサイクリン、またはTet-On遺伝子発現システムを示しています。テトラサイクリン誘導体であるドキシサイクリンの存在下では、逆テトラサイクリン制御トランスアクチベータータンパク質からなるTet-Onシステムが活性化され、目的の遺伝子を発現します。...

インビボでの誘導性Tet-On調節可能なシステムベースの遺伝子発現:マウスモデルにおける標的遺伝子転写活性化のためのテトラサイクリン誘導遺伝子発現システム

このプロトコルは、同族のGFPレポーターおよびフローサイトメトリーを経由してGFPの発現を刺激するATFS能力を定量化した人工転写因子（ATFS）を迅速に構築するための実験的な手順を説明します。...

迅速な合成およびGFPベースの記者との化学的に活性化する転写因子のスクリーニング

ここで述べられている方法は、抗アポトーシス細菌のエフェクタータンパク質の活性を解剖するために、定義されたステップでアポトーシスシグナル伝達カスケードを誘導するために使用されます。この方法は、アポトーシス促進性または毒性タンパク質の誘導性発現、または他のシグナル伝達経路との干渉の解剖にも使用できます。...

誘導発現系を適用すると、細胞内シグナル伝達と細菌の病原性因子の干渉を研究するために、

このプロトコルは、細胞分化およびアフリカツメガエル胚発生の間にマイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（MAPK）活性を調節するための光発生戦略を記載する。この方法は、哺乳動物細胞培養物およびアフリカツメガエル胚のような多細胞生きている生物において、高い空間的および時間的分解能を有するMAPKシグナル伝達経路の可逆的活性化を可能にする。...

細胞分化中のマイトジェン活性化プロテインキナーゼ経路の光媒介可逆的調節<em&gt;アフリカツメガエル</em&gt;胚発生

ここでは、振動情報の光遺伝学的制御による細胞間伝達を分析および遺伝子発現のモニタリング...

制御、細胞間相互作用における遺伝子発現パターンを分析して光遺伝学的方法

このプロトコルでは、生きた動物の細胞強化lacリプレッサーとテト活性化システムを使用して興味の内因性遺伝子のトランスクリプションを条件付きで制御できるモデル...

体内の内因性遺伝子操作のリモート制御システムのアプリケーション

光応答性哺乳動物細胞を確実に制御するには、光遺伝学的方法の標準化が必要です。この目標に向けて、本研究では、ネガティブフィードバック光遺伝学遺伝子回路を用いた光誘導遺伝子発現の研究を標準化するための遺伝子回路構築、細胞工学、光遺伝学的装置操作、検証アッセイのパイプラインをケーススタディとして概説する。...

哺乳類細胞における安定した光遺伝学的遺伝子回路を確実にエンジニアリングおよび制御

光遺伝学は、幅広いアプリケーションを備えた強力なツールです。このプロトコルは、青色の光応答性TAEL/C120系を用いてゼブラフィッシュ胚における光誘導性遺伝子発現を達成する方法を示している。...

光遺伝学的TAEL/C120系を用いたゼブラフィッシュ胚における光誘導GFP発現

小分子基質であるルシフェリンを酸化するルシフェラーゼ酵素によって放出される生物発光光は、光感覚タンパク質を活性化するために利用することができ、それによって光刺激に別の次元を加え、時間的および空間的スケールにわたって細胞内の多数の光媒介機能の操作を可能にする。...

生物発光光遺伝学2.0:生体内および生体内で光感覚タンパク質を活性化するための生物発光の利用

微生物代謝の光遺伝学的制御は、発酵プロセスに対する柔軟な動的制御を提供する。ここでのプロトコルは、異なる体積スケールでの化学およびタンパク質生産のための青色光調節発酵を設定する方法を示しています。...

微生物化学およびタンパク質生産のための光制御発酵

このプロトコルは、タンパク質活性の可逆的な時空間制御のための設計された青色光活性化アロステリックスイッチ(LightR)ドメインの適用について説明しています。この研究では、Srcチロシンキナーゼをモデルとして利用し、光制御Src(LightR-Src)を開発および特性評価するための精巧なプロトコルを提供します。これは、酵素クラス間でのこのアプローチの多様性を示しています。...

光遺伝学的アロステリック制御によるタンパク質活性の時空間制御

学ぶ光遺伝学ツールLACEを用いた哺乳類細胞の遺伝子発現制御法。3DプリントLEDアレイとHEK293T細胞培養を組み合わせ、ハイスループットで最適化する手法を解説。

哺乳類の遺伝子発現を制御するための光誘導システムの迅速な最適化

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