JoVE 실험 백과사전
Neuroscience
0 조회수 • 1:37 분 • August 7th, 2025
돌연변이된 알파-시누클레인을 과발현하는 도파민성 뉴런을 포함하는 쥐 배아의 일차 중뇌 배양으로 시작합니다.
처리 웰의 배지를 테스트 화합물이 포함된 신선한 배지로 교체하고 대조군 웰의 배지를 일반 배지로 교체합니다. 그런 다음 배양하십시오.
대조군에서 알파-시누클레인은 도파민성 뉴런에 독성 응집체를 형성하여 신경돌기 수축을 유발하고 신경 세포 사멸을 초래합니다.
치료에서 시험 화합물은 알파-시누클레인과 상호 작용하여 응집을 방지하며 신경돌기 구조를 보존하고 신경 보호 기능을 제공합니다.
세포를 고정하고 투과시킨 다음 비특이적 결합 부위를 차단합니다.
도파민성 뉴런에 대한 추가 라벨링과 함께 모든 뉴런을 표지하기 위해 1차 항체와 함께 배양합니다.
세포를 세척하고 1차 항체에 특이적인 형광단 태그가 있는 2차 항체를 추가합니다.
도립 형광 현미경을 사용하여 차등적으로 표지된 도파민성 뉴런을 계산한 다음 공초점 현미경으로 전환하여 신경돌기 길이를 측정합니다.
대조군에 비해 치료에서 온전한 신경돌기를 가진 도파민성 뉴런의 수가 더 많다는 것은 테스트 화합물의 신경 보호 잠재력을 확인합니다.