줄기 세포 유래 신경 전구 세포를 인간 피질 절편으로 이식

피질 뉴런으로의 분화를 위해 준비된 줄기 세포 유래 뉴런 전구 세포의 부착 배양으로 시작합니다.

배지를 제거한 다음 효소를 첨가하여 세포외 기질을 파괴하고 세포를 분리합니다.

억제제를 사용하여 효소를 중화시킨 다음 신선한 배지를 추가합니다.

현탁액을 튜브로 옮기고 원심분리한 다음 상청액을 버려 세포를 분리합니다.

뇌 조직으로의 이식을 용이하게 하기 위해 기저막 기질에 세포를 재현탁한 다음 차가운 모세관에 넣습니다.

인간 피질 절편을 배지가 포함된 트랜스웰 어셈블리에 가져갑니다.

배지의 일부를 제거한 다음 세포 현탁액의 물방울을 조직에 주입합니다.

매트릭스가 응고될 수 있도록 배양합니다.

배지를 추가하여 조직을 담근 다음 배양하여 전구 세포가 뉴런으로 분화하고 신경돌기를 확장하며 숙주 피질 뉴런과 시냅스를 형성할 수 있도록 합니다.

이제 피질 절편을 분석할 준비가 되었습니다.

세포 배양 플라스크에서 배지를 제거합니다. 분화 7일째에 500마이크로리터의 트립신을 첨가하여 피질적으로 프라이밍된 GFP-lt-NES 세포를 분리하고 실온에서 5-10분 동안 배양합니다.

다음으로, 같은 부피의 트립신 억제제를 첨가한 다음 5밀리리터의 DDM 배지를 첨가합니다. 세포를 재현탁하고 세포 현탁액을 15밀리리터 튜브에 부드럽게 옮기고 300G에서 5분 동안 원심분리합니다. 한편, 인체 조직이 들어 있는 플레이트를 인큐베이터에서 후드로 옮기고 인서트 상단에서 2밀리리터의 배지를 제거합니다. 원심분리가 끝나면 상층액을 제거하고 차갑고 순수한 기저막 매트릭스에 세포를 재현탁한 다음 현탁액을 더 작은 튜브로 옮깁니다.

세포 현탁액을 흡입을 위해 고무 젖꼭지에 연결된 차가운 유리 모세관에 모으십시오. 다양한 부위에 반건조 조직 절편을 찔러 세포 현탁액을 작은 방울로 주입합니다. 젤을 섭씨 37도에서 30분 동안 응고시킵니다.

그런 다음 인큐베이터에서 후드로 플레이트를 다시 옮기고 인서트 상단에 2밀리리터의 인간 성인 피질 배지를 조심스럽게 추가하여 조직을 완전히 잠깁니다.