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Microbiology
0 조회수 • 2:35 분 • September 26th, 2025
C. elegans 유전자를 표적으로 하는 유전자 특이적 삽입물이 있거나 없는 RNAi 박테리아로 미리 얼룩진 한천 배지가 포함된 멀티웰 플레이트를 가져 와서 사용하십시오.
동기화된 L1 단계 웜을 웰에 시드하고 배양하여 RNAi 박테리아를 먹을 수 있도록 했습니다.
삽입물은 특정 벌레 유전자를 표적으로 하는 간섭 RNA를 생성하여 유전자 특이적 녹다운 표현형을 생성합니다.
웰에 완충액을 추가하고 벌레를 부드럽게 재현탁합니다.
현탁액을 깊은 웰 플레이트로 옮기고 웜이 중력에 의해 가라앉도록 합니다.
약간의 완충액을 유지하면서 상청액을 제거합니다.
웜을 완충액으로 세척한 다음 상청액을 버리고 소량의 완충액을 남깁니다.
다음으로, 병원성 박테리아가 포함된 멀티웰 분석 플레이트를 가져옵니다.
숙주-병원체 상호작용을 가능하게 하기 위해 정의된 수의 제어 및 녹다운 웜을 각각의 웰에 분배합니다. 병원성 박테리아는 벌레 사망을 유도하는 화합물을 분비합니다.
벌레 생존에 대한 유전자 특이적 녹다운의 효과를 평가하기 위해 벌레 사망률을 비교합니다.
웰당 300마리의 웜을 포함하는 24웰 플레이트의 웰당 1밀리리터의 S 기저를 추가합니다. 플레이트를 흔들어 웜을 부드럽게 교반한 다음 웜을 빈 멸균 24 딥 웰 플레이트로 옮깁니다.
벌레가 중력에 의해 약 5분 동안 가라앉도록 합니다. 상청액을 흡인하여 웰당 약 1밀리리터를 남긴 다음 각 웰에 7밀리리터의 S 기저를 추가합니다. 세척을 두 번 더 반복한 다음 최종 세척 후 약 400마이크로리터를 제외한 모든 상청액을 흡인합니다.
기아를 피하기 위해 박테리아를 384웰 플레이트에 피펫팅한 후 웜 분류기의 리샘플러 기능을 사용하여 22개의 웜을 384웰 플레이트의 각 웰에 분류합니다. 마지막으로 분류 후 소분자 또는 기타 실험 특정 물질을 추가합니다.