JoVE 실험 백과사전
Microbiology
0 조회수 • 2:47 분 • October 30th, 2025
유익한 박테리아로 전처리된 실험 쥐와 인산염 완충 식염수 또는 PBS를 투여한 대조군 쥐로 시작합니다.
생리적 스트레스를 유발하기 위해 두 쥐를 고온에 노출시킵니다.
대조군 쥐의 경우 열 스트레스가 장 상피 장벽을 파괴하여 장 유래 박테리아가 이동하여 내부 장기로 퍼질 수 있도록 합니다.
그러나 실험 쥐에서 유익한 박테리아는 상피 접합부를 보존하고 박테리아 전좌를 감소시키는 신호 분자를 방출합니다.
각 쥐로부터 수확한 간 샘플이 들어 있는 튜브를 채취하십시오.
PBS를 첨가하고 샘플을 균질화하여 박테리아를 완충액으로 방출합니다.
희석된 균질을 영양이 풍부한 한천 플레이트에 펴 바릅니다.
박테리아 콜로니가 형성될 수 있도록 플레이트를 배양합니다. 그런 다음 식민지를 세십시오.
대조군 샘플에서 더 높은 콜로니 수는 장 장벽 파괴 및 박테리아 전좌를 나타냅니다.
대조적으로, 실험 샘플에서 더 적은 콜로니는 박테리아가 장으로의 전좌를 제한하는 데 유익한 박테리아의 효과를 나타냅니다.
쥐를 B.subtilis BSB3 또는 PBS로 경구 위관으로 2일 동안 처리한 후 동물을 세분화하고 체온을 측정한 후 그룹 1과 2의 쥐를 실온에서 25분 동안 유지합니다. 그룹 3과 4의 동물을 섭씨 45도, 상대 습도 55%의 기후 챔버에 25분 동안 두십시오.
그런 다음 동물을 안락사시킨 후 몸통 혈액을 채취하고 텍스트 프로토콜에 따라 장기를 분리한 후 각 튜브에 멸균 PBS를 첨가하여 샘플의 부피 희석당 1-10 중량을 얻고 멸균 유리 조직 균질화기를 사용하여 균질한 조직 현탁액을 생성합니다.
다음으로, 멸균 PBS를 사용하여 각 샘플을 연속적으로 희석합니다. 그런 다음 모든 희석액 0.1밀리리터를 MacConkey's와 5% 혈액 한천, 헤민과 비타민 K1이 함유된 브루셀라 혈액 한천의 표면에 도금합니다. 플레이트를 배양한 후 콜로니 카운터를 사용하여 각 플레이트 그룹의 콜로니를 계산합니다.