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Microbiology
0 조회수 • 3:17 분 • November 28th, 2025
따뜻한 온도에서 유지한 녹은 부드러운 한천으로 시작합니다.
시험용 Pseudomonas 시링에 배양된 균주를 한천에 접종하세요.
그 후 세포를 고르게 분포시키기 위해 잠시 소용돌이를 돌립니다.
혼합물을 굳은 한천 플레이트에 부어 고르게 펴 뿌리세요.
뚜껑을 닫고 굳게 두세요.
굳어진 한천 표면에 필터링된 상청액을 발견하세요.
상정액에는 스트레스 유발 기증자 P. 시링기 균주에서 유래한 항균 분자인 박테리오신이 들어 있습니다.
배양판을 배양하여 박테리아 증식과 한천을 통한 박테리아 증산을 가능하게 합니다.
박테리오신은 시험 균주에서 특정 표면 수용체에 결합하여 그 세포막을 파괴하여 세포 사멸을 초래합니다.
이로 인해 한천에 투명 구역이 형성되는데, 이는 항균 분자인 박테리오신에 의해 시험 균주가 죽은 부위임을 나타냅니다.
배양액 1에서 100을 희석해 신선한 KB에 넣으세요. 배양물을 3시간에서 4시간 동안 실온에서 흔들어 배양합니다. 다음으로, 초순수한 물에 한천을 고출력 분리하여 멸균된 물 한천을 준비합니다.
사용 전에 녹은 연한 한천을 60도 수조에 보관하세요. 멸균 혈청 피펫을 사용해 3밀리리터의 연성 한천을 멸균 배양관에 옮깁니다. 배양관을 다시 물탕으로 돌려 용융 상태로 유지하세요.
오버레이를 붓기 전에 용융 한천을 식히되 굳지 않도록 하세요.
한천을 접종 전에 뜨겁고 완전히 녹인 상태로 유지하는 것이 매우 중요합니다. 그렇지 않으면 오버레이가 거칠게 보여져 해석이 더 어려워집니다.
멸균 후드에서 100마이크로리터의 시험 균주 배양물을 연성 한천과 와류에 접종하여 혼합합니다. 배양물을 손으로 10초에서 15초 정도 돌린 후, 한천 플레이트 바닥에 부어주세요. 접시를 사방으로 기울여 부드러운 한천이 바닥 한천을 고르게 덮도록 하세요.
접시를 덮고 20분에서 30분 정도 굳히세요. 굳어질 때 플레이트를 건드리지 않도록 주의하세요. 고체화되면 오버레이 위에 2에서 5마이크로리터 이상의 상청액을 묻혀 주세요.
플레이트를 실온에서 하룻밤 동안 부양시키세요. 다음 날 아침 결과를 관찰하고 기록하세요. 이 방법을 사용하면 두 가지 P. 시링에(P. syringae ) 균주가 서로 다른 박테리오신에 의해 억제됩니다. 균주 A는 고분자량 박테리오신인 테일로신에는 민감하지만, 대체 저분자량 박테리오신에는 민감하지 않습니다.