S. aureus의 대사산물 분석을 위한 액체 크로마토그래피–질량분석법 기반 접근법

규소 구슬이 포함된 담냉용액에 부유된 황색포도상구균 을 저온에서 보관하여 대사 상태를 보존하는 것으로 시작하세요.

박테리아를 저온 환경에서 균질화하여 세포 내 내용물을 방출하고, 대사산물의 효소 분해를 최소화합니다.

용해액을 원심분리하고 대사산물이 풍부한 상정액을 채취하세요.

추출물에 유기 용매를 첨가하고 용해성 대사산물에서 고분자를 침전시키기 위해 소용돌이를 만듭니다.

원심분리기로 침전물을 펠릿으로 옮기고 상청액을 바이알로 옮깁니다.

바이알을 액체 크로마토그래피-질량분석법에 넣으세요.

크로마토그래피 컬럼 내부에서는 대사산물이 고체 고정상과 화학적 특성에 따라 상호작용합니다.

대사산물을 희석하기 위해 완충제를 추가하세요. 그 후 대사산물을 질량분석기의 전기분사 이온화원으로 유도하여 이온화시킵니다.

이온들은 질량 대 전하 비율에 따라 분리됩니다.

결과 데이터는 참조 데이터베이스와 비교되어 대사산물을 식별합니다.

대사물 추출을 시작하려면 먼저 젖은 얼음 위에서 샘플을 해동합니다. 그 후 균질화 기내에서 6000rpm에서 30초간 4회 연속 가열하고, 사이클 사이에 드라이아이스 위에 2분간 냉각 시간을 가집니다.

용해액을 미리 냉각된 냉장 마이크로 원심분리관에서 최대 속도로 15분간 정액합니다. 원심분리 후에는 상정액을 깨끗한 마이크로 원심분리관으로 옮깁니다. 마이크로피펫을 사용해 샘플의 일부를 마이크로 원심분리관으로 옮겨 텍스트 프로토콜에 설명된 잔류 펩타이드 함량을 정량화합니다.

나머지 샘플은 영하 80도에 보관하세요. 액체 크로마토그래피 및 질량분석법을 통한 대사산물 분석은 텍스트 프로토콜을 참조하십시오.