수질 샘플에서 생존 가능한 대장균 검출을 위한 파지 기반 마이크로유체 분석

대 장균을 포함한 대장균이 있을 가능성이 있는 오염된 수질 샘플부터 시작하세요.

증류수에서 연속 희석하여 탁도와 미생물 부량을 줄이세요.

원하는 희석된 샘플을 영양 배지와 혼합하여 마이크로 유체 칩에 적재합니다.

진공 여과를 사용해 칩의 뱀 모양 채널 내 막에 박테리아를 포착하세요.

상부 챔버에 영양 배지를 넣고 배양하여 박테리아 회복을 촉진하세요.

배지를 루시퍼라제 유전자를 가진 대장균 특이적 파지 용액으로 교체하세요.

파지 감염을 허용하기 위해 인큐베이션을 진행하는데, 여기서 파지 DNA가 복제되어 숙주 DNA를 분해하고 새로운 파지를 생성하고 루시퍼레이스를 생성합니다. 그 후 감염된 세포는 용해되어 루시퍼레이스를 방출합니다.

진공 여과를 적용하여 루시퍼라제를 캡처막으로 옮깁니다.

루시퍼레이스와 반응하는 기질을 추가하여 발광 신호를 생성하세요.

광전자 증배관을 사용해 발광을 측정하는데, 이는 수중 생존 가능한 대장균 세포 수에 비례합니다.